毒理学评价-研2.ppt

找出这个试验方案的不足之处 毒理学试验设计问题： 找出这个试验方案的不足之处 试验材料的种子来源、种植地点及时间未做说明； 试验动物是否来源于有资质的试验动物养殖单位未做说明，且没有动物合格证号； 饲料配制完成后，没有进行营养水平是否平衡的检测； 试验环境描述“清洁通风的小鼠房内”，没有说明是否符合屏障环境要求，还是只是普通环境饲养； 90天喂养没有设置常规日粮对照组，不能确定小鼠的病变是否是动物自发性病变或是环境因素造成的； 没有设置低剂量组，不能确定病变是否存在剂量-反应关系。 转基因玉米事件解读 一是由于科学试验设计存在缺陷造成的“不安全”结论 如用法国转基因玉米喂养大鼠事件 奥地利转基因玉米喂养大鼠事件等 二是由于管理不当造成的转基因产品泄露事件 如美国星联玉米致敏事件 三是某些反对转基因组织或个人恶意造谣事件 如广西转基因玉米影响大学生精子活力事件 山西吉林转基因玉米影响猪产仔能力事件 明辨是非 尊重科学 不造谣，不听谣，不信谣 小白鼠服油10 d后，无一只动物死亡。 一次给药无法测出LD50。加大药量，一次给予最大量，对照组一次性灌胃生理盐水80mL/kg继续观察10 d. 未发现动物有任何局部或全身的中毒症状，无一只动物死亡。 实验组除有个别动物粪便稀软外，和对照组无任何差异。 实验结果表明，转基因油对小鼠灌胃的最大耐受量为60 mL/kg，相当于日平均用量的126倍。 王岚等.中国油脂, 2004, 11, 42-46. 致突变试验 Ames试验： 选用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型实验菌株 采用平板掺入法，将受试物和菌液，加入顶层琼脂中，混匀，迅速倒入底层培养基上 37℃培养48 h，计数每皿回变菌落数。 当受试物回变菌落数超过自发回变的2倍以上并有剂量——反应关系时即可判定为阳性。 致突变试验 小鼠骨髓细胞微核试验： 选用体重26～30 g ICR小鼠，每组10只，雌雄各半 各组均采用2次经口给受试物，中间间隔24 h，于第2次给受试物后6 h处死动物 取一侧股骨制备骨髓涂片。Gimsa染色后镜检计数嗜多染红细胞中的微核发生率 小鼠精子畸形试验： 选体重25～29 g 雄性性成熟小鼠 连续5天经口给予受试物，每天1次。 第35天处死动物 取两侧副睾，制备精子标本，伊红染色，高倍镜下检查每只动物的精子形态， 计数结构完整精子1000个，记录畸形精子数，计算精子畸形率。 致突变试验 案例：抗除草剂转基因水稻三致试验 薛大伟等采用了微核、精子畸变和组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌株回变菌落数（Ames）等细胞水平的试验对抗除草剂转基因水稻进行了致畸性试验研究。 没有发现转基因水稻产生致突变毒性。 薛大伟等. 农业生物技术学报, 2005, 13, 723-727 试验方法 试验结果 试验方法 试验结果 试验方法 试验结果 亚慢性毒性试验 传统的化学物质的安全性评价经验已经证实：与更长时间的喂养实验相比，90天的动物喂养实验已经足够反映出受试物的毒性作用。 NY/T1102－2006《转基因植物及其产品食用安全检测大鼠90d喂养试验》 亚慢性毒性试验（90天喂养试验） 试验目的 观察采用转基因食品长期饲喂动物后产生的毒性、营养学及非期望作用。 试验动物 啮齿类：大小鼠 非啮齿类：小型猪、犬 亚慢性毒性试验 试验方法 选用出生后6-8周的SD或Wistar大鼠。 随机分组，试验开始时各动物体重之间的差异应不超过平均体重的±20％。每组至少20只动物，雌、雄各半。 设转基因组、非转基因对照组和常规基础饲料空白对照组。 转基因组和非转基因对照组至少设低、中和高三个剂量组。 亚慢性毒性试验 剂量选择 在营养平衡的基础上，应以饲料中最大掺入量作为高剂量组。 转基因植物及其产品与传统对照物在饲料中的比例应一致。 饲料中其它各主要营养成分的比例和饲料的最终营养素含量也应一致。 检测指标 日常观察：一般表现、行为、毒性表现和死亡数量 营养利用：称量体重和进食量，计算体重增重和食物利用率 血常规：血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类、血小板数 血生化：丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、尿素氮、肌酐、血糖、血清白蛋白、总蛋白、总胆固醇和甘油三酯 检测指标 大体解剖：解剖和肉眼观察各脏器外部异常表现 脏器重量：心脏、肝、肾、肾上腺、脾、胸腺、睾丸的绝对重量和并计算相对重量（脏/体比值），进行组织、器官的组织病理学检查 亚慢性毒性试验 案例：59122转基因玉米大鼠90天喂养试验 59122抗虫玉米是美国杜邦公司研发的含有一种抗除草剂筛选基因（pat）与两种抗虫基因（cry34Ab1与cry35Ab1）的抗虫转基因玉米