0免疫组化操作.docVIP

石蜡切片HE染色一、取材、固定： 取材：厚度一般为0.3cm(不应0.5cm)，面积一般为（1.0-1.5）cm x (1.0-1.5)cm 固定：10%中性福尔马林、4%甲醛、环保固定液 量为组织块总体积的10-20倍 室温固定18-48h以后，流水冲洗24h，置于70%~80%乙醇中，可长期保存; 4度固定可延长至一周. 二、脱水和包埋：（加热抗原修复过程中组织脱片的主要原因是取材过厚以及脱水浸蜡处理不当所致） 95%乙醇 2-4h 95%乙醇 2h 无水乙醇Ⅰ 1.5h 无水乙醇Ⅱ 1h 二甲苯+无水乙醇（1：1） 20min 二甲苯Ⅰ 10min 二甲苯Ⅱ 10min-------------(注：脱水透明时间可适当延长) 浸软蜡（50~52℃）（二道） 各30min 浸硬蜡（58~60℃）（二道） 各 30min 包埋：注意温度、切面。 三、切片： 修、切4μm、展(40℃温水)、贴、烤（55~60℃，2~6h） 四、脱蜡至水：(脱蜡要彻底,时间宁长勿短!) 脱蜡：二甲苯Ⅰ 5-10min 二甲苯Ⅱ 5-10min 脱苯：无水乙醇Ⅰ 3-5min 无水乙醇Ⅱ 3-5min 水化：95%乙醇→85%乙醇→75%乙醇→50%乙醇