水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量测定方法.docVIP

水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量测定方法 　　摘要：目的 建立水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量测定方法。方法 对高效液相色谱法（HPLC）的色谱条件进行摸索，并采用正交设计法考察供试品溶液的制备条件。结果 HPLC色谱条件为：Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为乙腈（A）-0.4%醋酸（B）梯度洗脱，流速1.0 mL/min。样品供试液制备条件为：药材破碎度过四号筛，药材称样量为0.4 g，甲醇浓度为50%，提取时间为40 min。结论 建立的HPLC含量测定方法准确可靠，可作为水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总量的测定方法。 　　关键词：水银花；灰毡毛忍冬皂苷乙；川续断皂苷乙；含量测定；高效液相色谱法 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）04-0054-04 　　水银花是忍冬科植物毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehder的干燥花蕾或带初开的花。广西壮族民间习将其作为金银花使用，具有清热解毒、疏散风热的作用，用于风热感冒、咽喉肿痛、痢疾、疮疡肿毒、丹毒[1]。2010年版《中华人民共和国药典》（一部）“山银花”来源为忍冬科植物灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、华南忍冬Lonicera confusa DC.或黄褐毛忍冬Lonicera fulvotnetosa Hsu et S.C.Cheng.的干燥花蕾或带初开的花，“金银花”来源为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花[2]，水银花则未收入。文献记载，忍冬属植物部分种含有灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙，如从毛花柱忍冬和灰毡毛忍冬花蕾中分离得到灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙等[3-4]，从华南忍冬中分离出灰毡毛忍冬皂苷乙[5]。为正确评价和控制水银花药材质量，本研究以灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量作为指标，建立高效液相色谱法（HPLC）测定水银花含量的方法。现报道如下。 　　1 仪器与试药 　　日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪，带自动进样器， ELSD-LT Ⅱ蒸发光散射检测器，LC solution色谱工作站；Waters2695高效液相色谱仪，带自动进样器，Alltech ELSD 2000ES蒸发光散射检测器，Empower工作站；SB3200DTS双频超声清洗仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）；XS205电子天平（瑞士梅特勒公司）；摩尔分子超纯水器（美国热电公司）。 　　水银花药材3批（1号，广西药用植物园，采集时间2011年4月；2号，马山县加方乡加让村拉林屯，采集时间2010年10月；3号，隆安县城厢镇良安村那料屯，采集时间2011年5月），其中1、2号样品的对号腊叶标本经广西中医药研究院方鼎研究员、广西食品药品检验所黄燮才主任中药师鉴定，均为忍冬科植物毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehder。灰毡毛忍冬皂苷乙对照品（含量99.8%，批号20152-201003）、川续断皂苷乙对照品（含量98.3%，批号20153- 201003）均购自南昌贝塔生物科技有限公司。流动相所用甲醇和乙腈均为色谱纯（美国Fisher公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　2.1.1 色谱柱的选择 在同一色谱条件下，分别对Diamonsil C18柱、KF C18柱、Agilent ZoRbAx SB-Aq C18柱（均为250 mm×4.6 mm，5 ?m）进行摸索。结果上述3根色谱柱均可得到良好的分离效果，故选Diamonsil C18柱作为色谱柱。 　　2.1.2 流动相的选择 在同一色谱条件下，分别对甲醇-水溶液（55∶45）、乙腈-0.4%醋酸（27∶73）等度洗脱、乙腈（A）-0.4%醋酸（B）梯度洗脱（0～10 min，88.5%→85%B；10～12 min，85%→71%B；12～18 min，71%→67%B；18～30 min，67%→55%B）等流动相进行摸索。结果乙腈（A）-0.4%醋酸（B）梯度洗脱的流动相系统较甲醇-水溶液（55∶45）和乙腈-0.4%醋酸（27∶73）分离效果好，故选择乙腈（A）-0.4%醋酸（B）梯度洗脱。流速分别考察了0.8、1.0、1.2 mL/min不同流速，结果3种流速洗脱，灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙峰均可得到良好的分离效果，故选择流速为1.0 mL/min。 　　2.2 提取溶剂及方法 　　分别取6份水银花粉末0.4 g。其中2份