Notch信号通路分子在舌鳞癌中的表达及意义.docVIP

Notch信号通路分子在舌鳞癌中的表达及意义 　　[摘要] 目的 明确Notch信号通路受体Notch1、Notch3及其配体Jagged1、Jagged2在舌鳞癌中的表达及其意义。方法 通过逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和Western blot检测74例舌癌患者的组织标本（舌癌及癌旁组织）和人舌癌Cal-27细胞株中Notch1、Notch3、Jagged1和Jagged2 mRNA与蛋白质的表达水平，分析其与细胞增殖及临床病理的关系。结果 舌癌、癌旁组织及Cal-27细胞株中均检测到Notch1、Notch3、Jagged1、Jagged2 mRNA和蛋白质的表达。Notch1和Notch3蛋白在舌癌中的表达率高于癌旁组织，而Jagged1和Jagged2蛋白在舌癌和癌旁组织中的表达率无明显差异。Notch1和Notch3蛋白的表达和舌癌的临床分期具有相关性。4种信号蛋白的表达与患者的年龄、性别和临床病理分级无相关性。Notch3和Jagged2的表达具有相关性。Notch1蛋白在淋巴结转移阳性病例中的表达率高于转移阴性的病例，Jagged1在转移阳性病例的表达分级高于阴性病例。结论 Notch信号通路分子在舌鳞癌中表达活跃，与舌癌的发生发展有重要的相关性。 　　[关键词] 口腔癌； 口腔黏膜； Notch； Jagged1； 信号转导； 舌癌 　　[中图分类号] R 739.86 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.03.021 　　Notch信号途径是由配体、受体以及下游的DNA结合蛋白构成的连锁信号通路；配体包括Jagged1、Jagged2、DLL1、DLL3和DLL4等，受体包括Notch1、Notch2、Notch3和Notch4等[1-2]，其下游蛋白有HES1 　　和HES5等[3]。虽然这些配体和受体在结构上有诸多 　　相似之处，但作用迥异[2]。Notch信号通路可以参与 　　多种细胞过程[4]，其异常与各种肿瘤的发生有关[5]； 　　根据细胞类型和组织类型不同而具有抑瘤或者促瘤作用[6]，在同一组织不同疾病中也可能具有抑瘤或者 　　促瘤作用[7]。本研究拟探讨Notch1、Notch3、Jagged1 　　和Jagged2的mRNA与蛋白质的表达水平，并研究其与患者的临床病理特征之间的联系。 　　1 材料和方法 　　1.1 临床资料 　　1.1.1 病例 选取2005—2007年间在中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院诊断为舌癌并行手术治疗的74例患者采集样本；所有病例均为未经放化疗的原发病例，年龄为25～77岁，平均年龄54.5岁，男性40例，女性34例；TNM分期和病理分级见表1。 　　1.1.2 组织标本的收集 所有标本均为术中获取，癌旁标本取自舌癌边界以外2 cm的舌黏膜，均经病理证实。标本一部分放入-80 ℃保存，准备提取RNA和蛋白质；另一部分放入甲醛溶液中固定，石蜡包埋后采用免疫组织化学染色。 　　1.2 细胞株 　　人舌鳞状上皮癌细胞株Cal-27购自美国模式培养物集存库（American type culture collection，ATCC）。 　　1.3 引物 　　本实验用于逆转录聚合酶链反应（reverse trans- 　　criptase-polymerase chain reaction，RT-PCR）的引物由大连TAKARA公司合成，引物序列见表2。 　　1.4 实验方法 　　Cal-27细胞采用免疫荧光化学染色，按照常规方法操作，进行异硫氰酸荧光素（fluorescein isothio-cyanate，FITC）标记和二脒基苯基吲哚（diamidino-phenyl-indole，DAPI）染色；临床组织样本采用免疫组织化学染色，按常规方法操作。细胞总RNA的提取按试剂盒说明书操作，RNA质量检测合格后，通 　　过逆转录获得的cDNA即可用于聚合酶链反应（poly- 　　merase chain reaction，PCR）。PCR扩增按下列程序做循环：Notch1、Jagged1、Jagged2和β-actin，94 ℃预变性2 min，94 ℃变性30 s，56 ℃退火51 s，72 ℃延伸1 min，共35个循环；Notch3，94 ℃预变性2 min，94 ℃变性30 s，61.8 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min，共35个循环。上述所有反应到最后都要在72 ℃下总延伸10 min，完成后电泳。组织蛋白提取后，根据质量浓度调整上样量，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel elec