RP—HPLC法测定酚酞片中酚酞的含量.docVIP

RP—HPLC法测定酚酞片中酚酞的含量 　　[摘要] 目的 建立RP-HPLC法测定酚酞片的含量。 方法 采用 Agilent C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），柱温为25℃，以甲醇-0.05 mol/L NH4H2PO4（用磷酸调pH至3.31）（70：30）为流动相，流速为1 mL/min，检测波长为275 nm。 结果 酚酞在（19.968～139.776） μg/mL的范围内线性关系良好（r = 0.9999，n = 5），测得平均回收率为100.87%，RSD = 0.88% （n = 9）。 结论 该方法稳定可靠，重现性好，可有效控制酚酞片的质量。 　　[关键词] RP-HPLC；酚酞片；含量测定 　　[中图分类号] R927 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）23-0081-02 　　酚酞片为刺激性泻药，口服后在肠内碱性环境中形成可溶性钠盐，刺激结肠而产生导泻作用，作用温和，服药后4～8 h可排除软便[1]。止泻药及镇吐药，用于治疗习惯性顽固性便秘。2010年版《中国药典》[2]采用UV-Vis分光光度法对酚酞原料和其片剂测定含量。本文参阅相关文献[3-8]采用RP-HPLC法测定酚酞片的含量，与UV-Vis分光光度法测得结果一致，RP-HPLC法亦可准确测定出酚酞片中酚酞的含量。 　　1 仪器与试药 　　高效液相色谱仪（沃特斯Waters 2695），二极管阵列检测器（DAD 检测器）；BS 110S（d=0.1mg）、AB135-S（d=0.01 mg）、电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；酚酞对照品（批号：100091-199601，含量为100.0%）；酚酞片（批号：1202731、120302、120103）；所用试剂均符合色谱条件要求。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：沃特斯Waters C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）， 柱温：25℃；流动相：甲醇-0.05 mol/L NH4H2PO4（用磷酸调pH至3.31）（70：30）；流速：1 mL/min；检测波长：275 nm；进样量：10 μL。 　　2.2 溶液制备 　　2.2.1 对照品溶液 精密称取酚酞对照品适量，用乙醇作溶剂，配置成浓度为0.5 mg/mL的对照品储备液；精密量取储备液适量，用流动相定量稀释成0.05 mg/mL的对照品溶液。 　　2.2.2 供试品溶液 取供试品适量，加乙醇溶解后，用流动相定量稀释成0.05 mg/mL的供试品溶液。 　　2.2.3 空白样品溶液 按处方比例称取辅料适量，按供试品溶液制备方法，制备成与供试品溶液相当的空白溶液。 　　分别吸取2.2.1、2.2.2与2.2.3项下溶液按2.1项下色谱条件进行检测。记录色谱图，酚酞的保留时间约为1.9 min，理论板数为3123，与相邻杂质峰的分离度1.5，在空白样品溶液色图谱中，酚酞峰位置上无峰出现，表明辅料无干扰。 　　2.3 标准曲线制备 　　精密量取上述对照品储备液1.0、2.0、3.0、5.0、7.0 mL，分别置25 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，经0.22 μm滤膜滤过后备用。取上述不同浓度对照品溶液，按2.1项下色谱条件，分别注入色谱仪，记录色谱图与峰面积。峰面积分别为171375、333980、501665、828292、1161787。以对照品浓度C（μg/mL）为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制线性方程，回归方程为A = 8264.82C + 5304.57（r =0.999 9）。结果表明，酚酞在（19.968～139.776）μg/mL的浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系。 　　2.4 精密度试验 　　取对照品溶液，按2.1项下色谱条件，连续进样5次，峰面积依次为411039、411522、411646、410551、410676，RSD为0.12%。 　　2.5 稳定性试验 　　取供试品溶液（批号：120103），按2.1项下色谱条件，分别于0、4、7、13、24 h进样，记录色谱图与峰面积，峰面积分别为414224、411818、414028、413951、414033，RSD为0.24%，表明酚酞溶液在24 h内稳定。 　　2.6 加样回收率试验 　　精密称取已知含量的样品细粉适量（批号：120103）（约相当于酚酞50 mg）9份，分别用乙醇溶解稀释至浓度为0.5 mg/mL供试品储备液；精密称取酚酞对照品25.67 mg，用乙醇作溶剂，配置成浓度为0.5 mg/mL的对照品储备液；精密量取供试品储备液5 mL 9份，分别置9个100 mL容量瓶中，再精密量取对照品储备液3.0、5.