乳腺癌HER2蛋白阳性表达的基因状态及其与P53蛋白相关性研究.docVIP

乳腺癌HER2蛋白阳性表达的基因状态及其与P53蛋白相关性研究 　　[摘要]目的 研究乳腺癌HER2蛋白表达阳性的基因状态及其与P53蛋白相关性，探讨其与乳腺癌发生、发展的内在关系。方法 选取257例HER2蛋白表达阳性的浸润性乳腺癌样本，分别应用荧光原位杂交（FISH）法和免疫组织化学EliVisionTMplus法对标本中的HER2基因和P53蛋白、ER和PR受体进行检测并做相关性分析。 结果 ①HER2基因扩增率64.59%（166/257）；其中IHC（2+）56.48%（109/193），（3+）89.06%（57/64）；HER2基因扩增和其蛋白阳性表达比较有显著相关性（P 0.05）。 结论 HER2基因扩增率与P53蛋白表达率呈正相关，两者指标的联合检测对乳腺癌的转移、预后评估具有重要的参考意义。 　　[关键词] 乳腺肿瘤；HER2；P53蛋白；免疫组织化学；荧光原位杂交 　　[中图分类号] R737.9 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）33-0113-03 　　随着科研的发展，分子生物学指标作为癌症发展、治疗及预后评估的价值取得了长足发展，受到越来越多的国内外学者高度重视。HER2基因位于人17号染色体长臂21位，编码一种与人表皮生长因子受体高度同源的酪氨酸激酶受体，在乳腺癌的侵袭、治疗、预后评估中起着重要作用。选取我院257例HER2蛋白表达阳性的浸润性乳腺癌手术切除标本，采用荧光原位杂交（FISH）法检测标本中的HER2基因扩增状态，探讨其与P53蛋白表达及临床预后因素的关系。 　　1资料与方法 　　1.1病例资料 　　收集我院病理科2010年10月～2013年6月外检手术切除浸润性乳腺癌根治病例，筛选出257例HER2蛋白阳性表达标本，其中HER2蛋白（2+）193例，（3+）64例，患者均为女性，年龄26～79岁，平均51岁。病理类型包括浸润性导管癌224例，伴髓样特征的浸润性癌15例，浸润性微乳头状癌10例，大汗腺癌8例。 　　1.2 免疫组织化学检测（IHC） 　　采用EliVisionTMplus法染色，所用HER2蛋白、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和P53蛋白抗体试剂盒均采购自福建迈新公司。手术切除标本均10%中性福尔马林固定，经脱水石蜡包埋，4μm连续切片，于65℃烤箱烤片2h，脱蜡、水化，柠檬酸盐高压修复，按照试剂盒操作说明书步骤严格执行。实验以预知阳性标本作为阳性对照，PBS替代一抗为阴性对照。结果判定：HER2判读标准 0：全部癌细胞中细胞膜无着色者；1+：任何比例癌细胞呈现微弱或不完整的细胞膜着色者；2+：10%癌细胞呈现轻-中度、完整但不均匀的细胞膜着色或30%癌细胞呈现强而完整的细胞膜着色者；3+：≥30%癌细胞呈现强而完整的细胞膜着色者。ER、PR和P53判读标准：阳性着色部位均为癌细胞核。癌细胞总数5%着色为0；5%～25%着色为1+；26%～50%着色为2+，50%以上着色为3+。 　　1.3 荧光原位杂交（FISH） 　　HER2基因探针试剂盒及蛋白酶购自北京金菩嘉医疗科技有限公司。方法：取上述4μm切片60℃烤片过夜，脱蜡、梯度水化，于蒸馏水煮沸30min，37℃蛋白酶消化，滴加探针后83℃变性5min，42℃杂交过夜，洗涤干燥，DAPI复染，荧光显微镜下观察。结果判读：HER2基因信号显示为橘红色，17号染色体着丝粒信号显示为绿色，计数30个癌细胞，分别统计橘红色信号与绿色信号总数值，然后计算其比值。比值2.2或众多橘红色信号成簇分布者归入阳性，视为基因扩增；比值1.8～2.2 者，扩大癌细胞计数到100个或重新检测。 　　1.4 统计学方法 　　采用SPSS13.0统计软件分析。采用非参数检验判断HER2基因扩增与蛋白表达状况及与年龄、肿瘤大小、病理学类型、淋巴结转移和ER、PR表达的相互关系；以P 0.05为具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 乳腺癌HER2基因扩增和HER2蛋白表达的关系 　　本组257例浸润性乳腺癌，HER2基因扩增（图1）率64.59%，分别为HER2蛋白（2+）（图2）193例，HER2基因扩增109例，占比56.46%。HER2蛋白（3+）（图3）64例，HER2基因扩增57例，占比89.06%。统计结果显示，比较HER2基因扩增与HER2蛋白不同强度的表达，差异具有统计学意义（P 0.01）。见表1及图1～4。 　　2.2 HER2基因扩增与P53蛋白表达及预后因素的关系 　　HER2基因扩增和P53蛋白表达（图4）与乳腺癌患者发病年龄、肿瘤大小、病理学类型无关（P 0.05）。HER2基因扩增和P53蛋白表达与患者腋窝淋巴结转移、ER