第四章卫生微生物研究和检测的讲述.ppt

第三章 环境中微生物的主要类群 原核细胞型微生物 真核细胞型微生物 非细胞型微生物 原核细胞型微生物 细菌（致病菌、条件致病菌，非致病菌） 放线菌 鞘细菌 滑动细菌 蓝细菌 真核细胞型微生物 真菌 藻类 原生动物 真菌 酵母菌 霉菌 第四章 卫生微生物研究和检测的方法 卫生微生物检测的特点和基本原则 卫生指示微生物 卫生微生物研究和检测的方法 第一节卫生微生物检测的特点与基本原则 特点： 检测对象：致病、非致病、条件致病微生物 标本来源：人体、环境 环境中致病微生物数量少，需要特异的检测方法，并且多依靠指示微生物 原则： 样品的采集原则 样品的运送原则 实验室检验原则 一、样品的采集原则 （一）样品必须要有代表性: 采样量：满足检测要求 采样部位：均匀采样 采样时间：便于分析微生物的动态变化 采样批号：尽量检测每个批号 （二）避免对样品的污染 器材灭菌、无菌操作 （三）避免对样品中微生物的杀灭和抑制 避免有毒物质的残留和高温影响 （四）对样品进行详细的标记 这是基本要求 二、样品的运送原则 尽快送检： 一般3-4h内送检，减少细菌死亡和进一步繁殖带来的影响。 注意保护待检的微生物： 一定的温度 加保护剂 运送培养基，如病毒、厌氧菌等 根据生物安全规定，妥善包装待运输的标本 进行完善的样品交接 必须有样品送检单，与实验室人员逐项核对后交接 三、实验室检验原则 具有相应的实验室硬件设施： 1级（P4实验室）：可检验危害性最严重的病原体，如天花病毒、HIV、SARS病毒等。 2级（P3实验室）：可检验特殊危险致病菌，如霍乱菌。 3级（P2实验室）：检验一般致病菌。 4级（P1实验室）：检验非致病菌。 具有合格的人员和标准检验方法 人员要有资质，并经常接受培训 采用国家标准方法或公认方法（WHO、EPA等） 加强实验室质量控制 仪器、设备、试剂：定期检定和校准 注意记录和核查：如GLP实验室 报告规范：数据规范，完整签名盖章 实验室应有应急措施 应对突发事件能力 需做多种检验时，微生物优先 恰当的样品处理与检验 第二节卫生检验中的指示微生物 指示微生物（indicator microorganism）定义： 在常规卫生监测中，用以反映检品卫生状况及安全性的指示性微生物。 设定指示微生物的原因 微生物（包括致病和非致病的）种类繁多，不可能一一检测 环境中致病微生物往往数量少，检测困难，需要用相对易于检测的微生物来间接反映 一、指示微生物的选择 总的原则：检测简便，相关性好 粪便污染指示菌的选择 检测简便： （易检出，易定量计数。） 相关性好： （与粪便污染的相关性好。 与肠道致病菌的相关性好。 ） 指示微生物的种类： 反映微生物综合污染：细菌、霉菌和酵母菌落总数 反映微生物污染来源：粪便污染指示菌（大肠菌群、粪大肠菌群）;空气污染指示菌（溶血性链球菌等） 不得检出的致病微生物 间接反映致病微生物：如反映肠道病毒的噬菌体等 消毒效果指示菌：嗜热脂肪芽孢杆菌（压力蒸汽灭菌）；短小芽孢杆菌（电离辐射灭菌）；枯草杆菌黑色变种芽孢（环氧乙烷灭菌） 二、常用的指示微生物 （一）菌落总数 1、菌落总数的概念和种类 概念：单位量的被检样品 (g、ml、cm2、m3)内，所含有的能在某种培养基上经一定条件培养后生成的菌落数量。 种类：细菌菌落总数（不能说细菌总数） 、霉菌和酵母菌菌落总数。 报告： cfu/每单位样品量，如： cfu/ g、 cfu/ ml。(cfu ，colony forming unit) 2、菌落总数的卫生意义 菌落总数是判定检样被微生物污染程度的指示菌，是某些样品的卫生限量标准。 3、菌落总数的测定方法类型 标准平板计数法、表面涂布法 （二）粪便污染指示菌 1．大肠菌群(coliform group) 概念：大肠菌群系指一群能在37℃、24h内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌。 种类 ：总大肠菌群 、耐热大肠菌群（粪大肠菌群 ） 大肠菌群的卫生学意义：是常规检测的卫生指示菌，饮用水、生活用水、各类产品（食品、药品、化妆品等）都要进行检测，推断检样中有无被肠道致病菌污染的可能。 测定方法：多管发酵法、滤膜法、纸片法。 大肠菌群检测： 35 ~37℃生长：培养于这个温度下 24h内发酵乳糖产酸产气：培养基中加乳糖， 24小时内观察是否产酸产气 需氧或兼性厌氧：一般孵箱可 革兰阴性无芽孢杆菌：革兰染色，光镜下观察。 其他粪便污染指示菌 三、其他指示微生物1、不得检出的致病菌 2、肠道病毒指示微生物 第三节 卫生微生物研究和检测的方法 目标：检测环境微生物的种类、数量。 样品的处理 损伤菌的复苏 选