免疫细胞功能的测定精选.ppt

免疫细胞功能的测定 上海交通大学医学院 胡翊群 教授 T细胞增殖功能测定 基础理论 本技术用于评估T细胞对各种刺激的增殖能力。T细胞增殖能力是反映T细胞功能的一个重要指标。 T细胞功能的测定 刺激T细胞增殖的因素及意义 1. 特异性抗原： 引起寡克隆活化增殖。 克用于判断抗原免疫的效果（疫苗接种）和回忆反应能力，也能反映T细胞总体的功能。 2. 丝裂原：多克隆。 3. 刺激信号转导分子：多克隆。 T细胞增殖功能测定 T细胞增殖测定方法 1. 显微镜下观察细胞形态与细胞计数。 2. 放射性核素掺入试验。 细胞增殖时，DNA复制，须从培养液中补充核苷酸。用放射性核素标记培养液中提供的胸腺嘧啶（3HTdR），当DNA复制时， 3HTdR掺入正在分裂的细胞的DNA中。细胞增殖程度与细胞内掺入的3HTdR的量成正比。通过用液闪仪定量测定培养细胞中的放射性强度，就可以确定T细胞增殖的能力与强度。 丝裂原诱导的增殖反应 诱导T细胞增殖反应的丝裂原 1. PHA（植物血凝素） 2. Con A（刀豆蛋白 A） 3. PMN（美洲商陆） 丝裂原诱导的增殖反应 技术方法 1. 用RPMI－10将PBMC配成1x106/ml的悬液。 2. 用100g/ml的PHA配制1:10、1:20和1:40稀释液。 3. 96孔