b型流感嗜血杆菌结合疫苗..docVIP

b型流感嗜血杆菌结合疫苗 b Xing Liuganshixueganjun Jiehe Yimiao Haemophilus Influenzae Type b Conjugate Vaccine 本品系用纯化的b型流感嗜血杆菌(Hib)荚膜多糖（Capsular polysaccharide，CPS）抗原，通过己二酰肼（ADH）与破伤风类毒素（Tetanus toxoid，TT）蛋白共价结合制成。用于预防b型流感嗜血杆菌引起儿童的感染性疾病，如脑膜炎、肺炎等。 1 基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2 制造 2.1 菌种 生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 2.1.1 菌种名称及来源 采用b型流感嗜血杆菌CMCC58547或CMCC58534菌株，来源于中国药品生物制品检定所。 2.1.2 种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3 种子批的传代 主种子批启开后传代次数不超过5代，工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。 2.1.4 种子批菌种的检定 检定菌种可用含羊血的巧克力培养基或Hib综合培养基。 2.1.4.1培养特性 b型流感嗜血杆菌菌种在普通营养琼脂培养基上不生长，在含羊血的巧克力培养基或在Hib综合琼脂培养基上生长，生长需要X因子（氯化血红素）、V因子（β辅酶A）；卫星试验阳性，菌落形状灰白色、 3.1.2.4 蛋白质含量 应小于10mg/g（附录VI B 第二法）。 3.1.2.5 核酸含量 应小于10 mg/g，核酸在波长260nm处的吸收系数(E1%1cm)为200 （附录II A）。 3.1.2.6 多糖分子大小测定 采用Sepharose CL-4B凝胶柱（1.6×100cm）测定， KD≤0.5的多糖回收率应不低于50%。（附录XXX）。 3.1.3 细菌内毒素检查 应不高于25EU/μg（附录XII E） 。 3.2 多糖衍生物检定 3.2.1 己二酰肼含量 应为16–45μg/mg（附录XXXX）。 3.2.2 残余氰化物含量 应不高于10ng/mg（附录XXXX）。 3.3 结合物原液检定 3.3.1 鉴别试验 采用免疫双扩散法（附录VIII Ｃ），应与b型流感嗜血杆菌免疫血清及破伤风类毒素免疫血清形成明显沉淀线。 3.3.2 化学检定 3.3.2.1多糖含量 以D-核糖为对照，按核糖含量计算结合物中多糖含量，应不低于28μg/ml（附录XXXX）。 3.3.2.2 蛋白质含量 应不低于48μg/ml（附录VI B 第二法）。 3.3.2.3 多糖与蛋白质的比值 按3.3.2.1和3.3.2.2测定结果计算，应为0.30-0.59。 3.3.2.4 高分子结合物含量 高分子结合物应为80%-100%或游离多糖≤20%（附录XXXX）。 3.3.2.5 分子大小测定 采用Sepharose CL-4B凝胶柱（1.6×100cm）测定，KD值应不高于0.20， KD值小于0.20的洗脱液回收率应不低于60%。（附录VIII G） 3.3.2.6 EDAC残留量 采用N.wilchek方法测定，EDAC残留量应低于10μmol/L（附录XXXX）。 3.3.3 无菌检查 依法检查（附录XII A），应符合规定。 3.3.4 细菌内毒素检查 应不高于5EU/μg（附录XII E）。 3.4 半成品检定 无菌试验 依法检查（附录XII A），应符合规定。 3.5 成品检定 3.5.1 鉴别试验 采用免疫双扩散法（附录VIII Ｃ），应与b型流感嗜血杆菌免疫血清及破伤风类毒素免疫血清形成明显沉淀线。 3.5.2 物理检查 3.5.2.1 外观检查 应为无色透明液体，无异物。 3.5.2.2 装量 按附录ＩＡ中装量项进行检查，应不低于标示量。 3.5.3 化学检定 3.5.3.1 pH值 应为5.0～7.0（附录V A）。 3.5.3.2 氯化钠含量 应为7.5-9.5/L (附录VII G)。 3.5.3.3 多糖含量 以D-核糖为对照，按核糖含量计算供试品中多糖含量，每１次人用剂量应为10～15μg（附录XXXX）。 3.5.3.4 高分子结合物含量 高分子结合物应为80%-100%或游离多糖≤20%（附录XXXX）。 3.5.3.5 分子大小测定 采用Sepharose CL-4B凝胶柱（1.6×100cm），KD值小于0.2的洗脱液回收率应大于60%（附录VIII G ）。 3.5.4 效力试验 每批疫苗皮下注射体重12-14克NIH（或BALb/c）小鼠10只，另取同批小鼠10只作为对照，注射0.85% 氯化