《1植物学实验的基本研究方法.ppt

戴锡玲 上海师范大学生物系 2012年2月 课程性质:园艺专业必修课学分：2分 (实验)总学时：3×18=54学时 教材:《植物学实验指导》，2012年3月参考书:1、王全喜，张小平主编，《植物学》，北京：科学出版社，2004年9月2、赵遵田，苗明升主编，《植物学实验教程》，北京：科学出版社，2004年3、叶创兴，冯虎元主编，《植物学实验指导》，北京：清华大学出版社，20064、贺学礼主编，《植物学实验实习指导》，北京：高等教育出版社，2004年上课要求:实验前必须做好实验预习工作，认真实验并写出实验报告考核方式：闭卷总评成绩=期末考试成绩（70%）+ 平时成绩（30%） 期末考试=实验操作内容(50%) + 实验理论内容(50%) 平时成绩=实验报告+实验操作考查+出勤率 一、实验目的 1. 培养学生掌握植物学研究的基本方法、养成良好的实验习惯、打下良好的实验基础。 2. 了解光学显微镜的基本结构和工作原理，并掌握其使用方法。 3. 了解常用的植物制片技术。 4. 掌握生物绘图的基本方法。 二、实验仪器 光学显微镜、刀片、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、滴管、蒸馏水 三、实验材料 洋葱鳞叶、洋葱表皮细胞永久封片 物 镜：通常有4倍（4×）、10倍（10×）、20倍（20×）、40倍（40×）和100倍（100×，油镜) 物镜数字：表示镜头的主要性能参数 “40”：放大倍数 “0.65”：镜口率（或称数值孔径，数值越大分辨率越高） “160”：镜筒长度（mm） “0.17”：盖玻片厚度（mm） 物镜的工作距离 ：从物镜组最前面一块透镜的表面到被观察标本的距离。 4×、10×、40×和100×物镜的工作距离分别为34.7、7.634、0.53和0.198毫米。 调焦时要特别小心，以免碰坏镜头或损坏标本。 反光镜/集光器： 简单光学显微镜，依靠反光镜反射自然光或灯光来提供光源； 高级光学显微镜，自身配备集光器，内有电光源，可通过调节电流的强弱来调节光线的强弱。 遮光器/聚光器： 简单光学显微镜，遮光器上面有大小不等的圆孔（光圈）。 高级光学显微镜，可通过调节聚光器内孔径光阑的大小来调节光线的强弱。 若将孔径光圈放大，图像亮度增高，分辨率增加，而反差减小； 若将孔径光圈缩小，图像亮度降低，分辨率下降，但反差增大。 因此，在观察时要调节聚光器孔径光圈以达到适当的反差和良好的分辨率。 2）标本放置 （1）放载玻片。 （2）从左侧观察移动载物台调节轮，使观察物于光束中央。 （3）双手调节粗准焦螺旋使载物台升至最高。 （4）调节目镜间距。 3）低倍镜观察（双眼同睁） （1）调节粗准焦螺旋下降载物台使物像清晰。 （2）调节细准焦螺旋（前后半圈）。 （3）观察部位于视野中央。 （4）左眼观察，右眼画图。 4）高倍镜观察 （1）侧面观察转换到高倍物镜（不跨油镜） （2）调节光源亮度旋钮 （3）调细准焦螺旋 （4）使观察物在中央，画图 5）更换载玻片 （1）载物台降到最低。 （2）转换到最低物镜。 （3）换新载玻片。 （4）低倍镜观察。 6）用后处理 （1）关闭电源，拔掉插座。 （2）载物台降到最低。 （3）取下载玻片。 （4）4倍和10倍物镜靠内呈“八”字放置。 （5）电线缠2圈半。 （二）常用的植物制片技术 （1）临时水封片 ① 准备好载玻片、盖玻片，擦拭时小心，以免弄碎玻片 ② 用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水，用镊子或解剖针取植物材料置于水滴上，并使材料展开或分散均匀； 练习：撕取洋葱鳞叶的内表皮制作临时水封片。 （2）徒手切片法 用左手的拇指和食指捏住材料，材料略高出指尖，以免切时伤及手指。右手握住双面刀片。材料和刀片浸润清水，以减少摩擦。 切割时用臂力带动刀片自左前方向右后方做水平切割移动，割下许多切片后，将切下的薄片轻轻移入盛水的培养皿中，从中挑选薄而透明的切片，放在载玻片的水滴中，加盖玻片观察。 （3）压片法 将植物的幼嫩器官处理后,涂抹或压在载玻片上，使组织成一薄层然后进行观察的制片方法。常用于染色体数目的检查。 步骤 : 取材、预处理、固定、解离、染色、压片、镜检和封固。 （4）石蜡切片法 将材料包埋在石蜡中进行切片，切片经染色（番红-固绿二重对染法：番红为碱性染料，能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色；固绿为酸性染料，能使细胞质及纤维素的细胞壁染成绿色），观察效果很好。 能将材料切成10微米左右的连续切片。 （5）离析法 原理: 用离析液使细胞的胞间层溶解，细胞之间彼此分离，获得分散的、单个的完整细胞，以便观察不同组织的细胞形态和特征。最常用的离析液有