对流免疫电泳精选.ppt

免疫电泳技术 免疫电泳技术 是将电泳与免疫扩散相结合的一种常用的免疫学实验方法 。 沉淀反应 是可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。 分类 火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。 定量的抗原加入到含有一定量的相应抗体的琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，引起抗原抗体的迁移和相互反应，当抗原与抗体分子达到适当比例时，形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰，峰的高度与待捡样中的抗原浓度呈正相关。 应用 当琼脂中抗体浓度固定时，以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标，抗原浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测抗原的含量；反之，当琼脂中抗原浓度固定时，便可测定待测抗体的含量(即反向火箭免疫电泳)。 对流免疫电泳 将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术。 此法操作简便，仅需30～60分钟，灵敏度比双向扩散高10～15倍；但缺点是特异性不如双向琼脂扩散高。 实验原理 实质上是定向加速的双向免疫扩散技术。 在pH8.6的缓冲液中，蛋白质抗原带负电荷向正极泳动；而抗体大部分属于Ig，由于分子量大，暴露的极性基团较少，在离子琼脂中泳动缓慢，同时受电渗作用的影响向负极泳动，在抗原抗体相遇的最适比例处形成乳白色沉淀线。 电渗是指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动。琼脂是一种酸性物质，在碱性溶液中