红树林根际解磷菌分离培养及解磷能力的研究.docVIP

红树林根际解磷菌分离、培养及解磷能力的研究 摘要:本实验从红树林根际分离出不同种类的解磷细菌,经过筛选获得一株解磷能力较强的菌株ZB0211,在纯培养的条件下,对这株解磷菌进行最适培养条件试验。结果表明:碳源以10 g#kg-1的蔗糖最佳,氮源以1 g#kg-1NH4Cl最好,10 g#kg-1NaCl浓度为最适生长浓度,最适初始pH值为715。同时进行的解磷能力实验也表明pH值、菌数与解磷能力这三者之间存在一定的相关性。 关键词:红树林;解磷细菌;分离;培养条件;解磷强度 磷是植物生长发育所必需的重要营养元素之一,但是土壤中的磷绝大部分呈有机或无机 磷化物状态,植物不能直接吸收,解磷菌能将植物难以吸收利用的磷转化为植物可吸收利用的 磷[1],因此,利用微生物的解磷作用弥补土壤磷素营养的不足,成为当前国内外非常关注的研 究课题。本研究试图利用微生物改善红树林土壤中磷素缺乏问题。红树林是生长在热带亚热 带海岸潮间带,受到海水周期性浸淹的木本植物群落。由于间隙水富含阳离子,磷酸盐通常沉 淀在底泥中,致使大量的磷元素不能被红树林直接利用[2],影响红树林的生长,所以提高磷素 利用率对促进红树植物生长有重要意义。本研究从红树林根际分离不同种类的解磷菌,并进 行培养条件及解磷能力的研究,为红树林人工接种解磷菌提供优良菌株与培养技术。 1 材料与方法 111 红树林根际解磷菌株的分离 从湛江高桥红树林保护区内采集红树植物根系,主要包括白骨壤(Avicennia marina (Forsk1)Vierh1)、无瓣海桑(Sonneratia apertalaBuch1-Ham )和木榄(Bruguiera gymnorrhiza( L1) Lamk ),用无菌胶袋装好带回实验室。在实验室内把附着在根表面的土抖掉,在流水下轻轻冲 洗干净后,再用无菌水冲洗5 ~ 8次,用消毒灭菌过的解剖刀切成015 ~ 110 cm的根段,分别 置于装有50 mL改良SRSM培养液的三角瓶中,在28 ~ 30e摇床培养5 d(190 r#min-1)。随 后取样稀释涂平板,挑取典型菌落进一步纯化培养[3]。112 解磷菌的培养 培养基采用改良的SRSM无机磷培养基[4]。采用液体振荡培养法(190 r#min-1),培养温 度为28 ~ 30e,培养时间3 ~ 5 d。 113 解磷菌数量测定方法 采用比浊法。将培养好的菌液在721型分光光度计上比色,以600 nm的光密度值(OD 值)作为解磷菌密度指标。 114 解磷能力的测定 11411 液体解磷能力测定 将不加磷源的改良SRSM液体培养基100 mL分装在250 mL三角 瓶中,1@105Pa,30 min灭菌,接种前精确加1 g灭菌Ca3(PO4)2粉,接种量4%,29 ~ 31e,190 r#min-1摇床培养36 h,9 500 r#min-1离心5 min,上清液用磷钼兰比色法[5]测定水溶性磷含量, 以水溶性磷含量占Ca3(PO4)2粉全磷含量的百分比作为磷细菌的磷素转化率。每株菌3次 重复。 11412 固体解磷能力测定 将筛选出的解磷能力较强的菌株,摇床培养24 h后的菌液适当稀 释后分别涂在装有15 mL固体SRSM培养基的平板上,30e恒温培养72 h,观测解磷透明圈 大小。 11413 pH值、菌数以及解磷能力动态测定 每隔6 h取样测定培养液的pH值、菌数和水溶性 磷含量。磷素转化率的测定方法同上,pH值用pHS-3C型酸度计直接测定,菌数的测定采用稀 释平板法。 115 培养条件的研究 基础培养基用111 g#kg-1K2HPO4可溶性磷源替换改良SRSM培养基的原有磷源。以下试 验每组处理均进行3次重复。 11511 碳源试验 去掉基础培养基中原有的碳源,分别添加10 g#kg-1的葡萄糖、蔗糖、淀粉3 种试验碳源。 11512 氮源试验 去掉基础培养基中原有的氮源,分别添加1 g#kg-1的NH4Cl、(NH4)2SO4、酵 母提取物以及酪蛋白水解物。 11513 pH值试验 采用基础培养基,灭菌前将pH值调至510、610、615、710、715、810。 11514 NaCl试验 基础培养基中的NaCl浓度分别为5、10、15、20、25、30 g#kg-1。 2 结果与分析 211 解磷菌分离结果 表1对分离菌株(10株)及引进的墨西哥红树林菌株(3株)的材料来源地、宿主植物和菌 落特征进行了描述。分离菌株来自三种宿主植物,菌落大都呈圆形或近圆形,表面光滑,质地 松软,其中ZB0211、ZB0212、ZB0204和ZW0405生长快,筛选优良菌株时可优先考虑。 212 解磷能力的比较 13株解磷菌的解磷能力见表2。从表2看出,供试菌株对磷的平均转化率为0106%~ 810