注射用特立帕肽对去卵巢大鼠骨质疏松的保护作用.docVIP

注射用特立帕肽对去卵巢大鼠骨质疏松的保护作用 　　【摘 要】为检测注射用特立帕肽对去卵巢大鼠骨质疏松动物模型的保护作用，评价其与进口制剂体内抗骨质疏松生物活性的一致性，选取健康Sprague Dawley大鼠，分别设立假手术组、模型组、注射用特立帕肽手术组，特立帕肽对照品手术组。连续给药16周后，评价其对实验动物大鼠各组胫骨密度值（bone mineral density，BMD）、股骨力学改变以及血清中ALP活力、钙磷含量变化的影响，结果表明注射用特立帕肽给药组可明显改善骨质疏松大鼠的骨密度及骨力学性能，部分逆转ALP活力的升高及血清钙磷的降低，且其体内抗骨质疏松活性与上市对照品基本一致，提示注射用特立帕肽在动物体内有较好的抗骨质疏松活性。 　　【关键词】注射用特立帕肽；骨质疏松；去卵巢；大鼠 　　【中图分类号】R977 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）06-0010-02 　　骨形成促进药在骨质疏松治疗中的地位越来越受到关注，特别是对于老年人和骨量低的人群，更需要用促进骨形成的药物来增加骨量。特立帕肽（Teriparatide）商品名为Forteo，由礼来公司研制开发，2002年12月在美国首次上市，为重组人甲状旁腺激素（rhPTH ）1-34，与内源性PTH类似，可与特异性高亲和性细胞表面受体结合发挥生物学作用[1]。动物实验表明，本品一日1次给药对成骨细胞的刺激作用高于其对破骨细胞的作用，可引起小梁骨和皮质骨表面的新骨生成[2]。 　　海南双成制药有限公司采用固相合成的方法制备了特立帕肽原料药，并采用冻干工艺制备了可供皮下注射的注射用特立帕肽（Teriparatide for injection），但自行制备的注射用特立帕肽的体内生物活性即对动物骨质量和生物力学性能的影响如何尚未加以确认。 　　依据药品审评中心2007 年9 月《合成多肽药物药学研究技术指导原则》[3]， 为更好验证注射用特立帕肽的体内生物活性，我们利用大鼠双侧卵巢摘除（OVX）致骨质疏松症模型，以上市原研产品为对照，对实验动物大鼠各组胫骨密度值（bone mineral density，BMD）、股骨力学改变以及血清中ALP活力、钙磷含量变化进行了比较，考察了注射用特立帕肽抗骨质疏松的体内活性，并验证其与上市原研产品活性的一致性，为进一步评价其临床疗效提供了数据支持。 　　1 材料 　　1.1药物 　　注射用特立帕肽：海南双成药业提供，批号分别20100602规格：20g；特立帕肽对照品：Eli Lilly and Company的上市产品Forteo，规格：600mg/2.4ml。 　　1.2实验动物 　　健康Sprague Dawley大鼠，体重（250±35）g左右，雌性，SPF级，购自浙江省医学科学院实验动物中心。按照清洁级别饲养管理，自由饮用消毒自来水，饲料为标准颗粒饲料，黑白光照各12小时，自由活动。 　　1.3主要试剂及仪器 　　0.9%注射用生理盐水（国药准字：、10% 水合氯醛；电子天平、 注射器、手术器械、骨密度测量仪（美国GE Lunar公司）、Zwick/Roell骨力学测量仪。 　　2 实验方法 　　2.1实验动物分组及给药剂量 　　实验大鼠48只，随机分为6组，分别设立假手术组、模型组、注射用特立帕肽手术组，特立帕肽对照品手术组进行活性评价。根据进口特立帕肽阳性药临床单次剂量（20 μg/60 kg，人）折算得大鼠的单次给药剂量为1.786 μg /kg，即1.786 ml /kg（1g/ml）。 　　2.2 双侧卵巢摘除致骨质疏松模型建立[4] 　　用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠（0.32ml/100g），进行双侧卵巢摘除手术，然后逐层缝合、消毒，做好术后护理。手术两周后，对各个实验组大鼠进行皮下给药1.786 μl /kg，其中假手术组和模型组给予相应的生理盐水。 　　2.3生物样本处理[5] 　　持续给药16周后，处死大鼠取其胫骨和股骨并检测相关的指标，主要有各组胫骨密度值（bone mineral density，BMD）比较、各组骨力学比较以及血液中ALP活力、钙磷含量变化。具体方法为：10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，打开腹腔后进行下腔静脉取血，静置1～2小时后4℃离心（3000rpm/min，15min）得血清，考察ALP、钙磷含量变化；分离出大鼠左右胫骨和股骨并用浸泡过生理盐水的纱布各自包裹，置于-40℃冰箱中保存，待检测。 　　3 活性评价 　　3.1胫骨BMD比较 　　骨密度仪可给出测定对象的骨密度值（bone mineral density，BMD），常以g/c