基因工程和基因组学.pptVIP

Western杂交: 用蛋白质电泳后转移到膜上进行分析 ③ 核酸序列测定 Sanger(1977)发明双脱氧核糖核酸链终止法:将序列反应分为A，C，G和T四管，每管中含有变性的DNA模板、DNA聚合酶、标记的引物、四种脱氧核苷酸，再掺入一种一定比例的双脱氧核苷酸(如A管中，即是腺嘌呤A双脱氧核苷酸，以此类推)。在DNA合成过程中，双脱氧核苷酸与互补序列配对被整合到正在延长的DNA链中，在不同DNA链上随机地整合在不同位置。由于双脱氧核苷酸在第三位 没有游离的羟基(-OH)，无法再连接另一个核苷酸，导致DNA链合成在这里终止。结果每一个反应管中都合成一系列不同大小的DNA分子。将四个反应产物并排点在聚丙烯酰胺凝胶上的四个孔中，电泳后每个孔中形成一条梯状DNA带，从底部往上阅读，即是5′到3′端的序列:CGCTCAGCTGGTGATTGTGT ④ 核酸序列分析 →测定的核酸序列是不是所需要的基因，或具有 什么功能，还要用计算机软件或生物学实验进 一步分析，才能最后得出结论。 →同源性比较是常用的方法之一。可从核酸及蛋 白质两种水平比较基因间的同源性。首先可将 测出的核酸序列同杂交的探针序列进行比较， 或将得到的序列发到BLAST等DNA Data库的网址 上比较，很快就可知道测得的序列与所有的已 知序列之间的同源程度。 →另一种方法是分析核