食品安全快速检测技术7-分子杂交技术课件.pptVIP

六、核酸分子杂交实验因素的优化 探针的选择 在大多数情况下，可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针 在检测单链靶序列时应选用与其互补的DNA单链探针或RNA探针 长的双链DNA探针特异性较强，适宜检测复杂的靶核苷酸序列和病原体，但不适宜于组织原位杂交 探针的标记方法 选择什么标记方法主要视个人的习惯和可利用条件而定； 但还应考虑实验的要求，如灵敏度和显示方法等 一般认为放射性探针比非放射性探针的灵敏度高 在对灵敏要求不高时，可采用保存时间长的生物素探针技术和比较稳定的碱性磷酸酶显示系统 六、核酸分子杂交实验因素的优化 探针的浓度 总的来说，随探针浓度增加，杂交率也增加 在较窄的范围内，随探针浓度增加，敏感性增加 膜杂交中32P标记探针与非放射性标记探针的用量分别为5～10ng/ml和25～1000ng/ml，而原位杂交中，无论应用何种标记探针，其用量均为0.5～5.0μg/ml 受不同类型标记物的固相支持物的非特异结合特性的影响 六、核酸分子杂交实验因素的优化 杂交率 现代杂交实验无论在液相杂交还是固相杂交均在探针过剩的条件下进行 在探针过量的条件下，杂交率主要依赖于探针长度（复杂度）和探针浓度。下面列出的公式适用于过剩单链探针对靶序列杂交的情形 t1/2=ln2