分子生物学实验九、十.pptVIP

分子生物学实验 实验九 细菌感受态细胞的制备和质粒DNA的转化 一、实验原理 将外源DNA分子引入受体细胞（一般指细菌）以传递遗传信息的过程称为转化（Transformation）。在自然生长状况下只有少数细菌如肺炎链球菌、芽孢杆菌等能发生转化作用，其它大多数细菌是不能发生转化的。 目前实际工作中所指的转化，主要包括质粒DNA、?噬菌体等载体以及它们的体外重组体进入细菌细胞的过程。 CaCl2处理的细菌细胞称为感受态细胞。DNA分子容易进入感受态细胞的详细机理还不是很清楚，但在一定条件下钙离子能使细菌细胞膜的通透性发生变化，DNA分子可能通过膜脂相收缩的瞬间所裂开的空隙穿透而过。 转化的目的：转化进入受体细胞的DNA分子往往具有不同于原细菌的遗传信息，转入的DNA会使受体细胞出现新的 遗传性状。 转化后的筛选：转化以后能否获得所期望的转化体，关键在于筛选，这就需要事先设计好使需要 的转化载体具有的遗传性状能与其它转化体以及非转化体有明显的区别，并易于检出。这样在转化后，即可从 大量转化体中筛出所需要的转化体。若将转化体细胞铺在含有氨苄青霉素和四环素的平板培养基上培养时，只 有那些带有抗性的转化体才能够生长成为菌落（克隆），其它非转化细菌则不能生长，此过程称为筛选，选出 了所需