基因工程-WJ20131208课件.ppt

转基因生物的意义是什么？ 转基因生物有广泛的应用价值： 生长发育、疾病发生和治疗的研究手段： 疾病的转基因动物模型 改良动植物性状： 产量、抗病性、耐寒性等 用于生产基因工程产品： 生产抗体、疫苗、细胞因子等 转基因动物的基本流程 构建携带目的基因的载体 外源基因导入：目的基因通过显微注射等方法注入实验动物的受精卵或着床前的胚胎细胞中 使目的基因整合到基因组中 将受精卵或胚胎植入体动物 使其发育成转基因动物 转基因动物的关键步骤有哪些？ 上游—如何改造基因？如何构建载体？ 中游—如何进行基因转移？如何进行胚胎移植？ 下游—如何进行基因的检测与细胞的筛选？ 上游—基因改造和载体构建 外源基因: 完整的转录单位，应顺式作用元件、结构基因和转录终止信号等 报告基因 (report gene) : 在表达载体中引入易于检测的提示重组体存在的基因 GFP、 LacZ、AP、LUC 常用哪些载体？ 腺病毒载体 逆转录病毒载体 非重组病毒载体：质粒等 中游—基因转移和胚胎移植 基因导入技术：物理、化学和生物学方法 显微注射法 (microinjection)：转基因的常规方法 胚胎干细胞法(embryonic stem cells，ESC)：更多用于基因剔除 逆转录病毒感染法 精子载体法 DNA显微注射法 制备超量受精卵 DNA 显微注射 转移卵到输卵管或子宫 鉴定转基