细胞免疫学实验20140606.ppt

Department of Microbiology and Immunology 6-June-2014? Department of Microbiology and Immunology 6-June-2014? 微生物学与免疫学教研室 内容提要 E花环实验 淋巴细胞转化实验 2 大吞噬实验 3 小吞噬实验 4 E花环试验 人外周血T淋巴细胞上能与绵羊红细胞结合的受体，称为E受体，即CD2分子或LFA-2 （淋巴细胞功能相关抗原-2） ；在一定的试验条件下，绵羊红细胞能与该受体结合形成以T细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称E花环形成试验。 T T B SRBC CD2 固定、染色 固定：取出孵育后的细胞，滴加0.8%戊二醛200μl （等体积），轻轻悬浮混匀，4℃孵育放置20-30min。 涂片：向上述细胞悬液中加50μl美兰染液，混匀，静置5min，取一滴于载玻片上，加盖玻片。 镜检 镜检：淋巴细胞呈蓝色，SRBC呈红色围绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附有3个或3个以上SRBC者为花环形成细胞（即E阳性细胞） 计数200个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并推测其T淋巴细胞百分率。正常值为：50～80%。 注意：计数及摇匀细胞时动作应轻柔，避免打散已形成的花环 结果 E花环分类 Ea-RFC(效应T细胞)：正常值为15~35%。 （activated rosette formation cells,A-RFC）。 E-RFC(总和)：正常值为60~80%。 意义： ①?? E-受体为T细胞所特有，是鉴定T细胞的重要标志之一，还用于T细胞的分离。 ② ?用于检测患者外周血中T细胞的比例及数目，间接反映患者细胞免疫功能。 视频动画 内容提要 淋巴细胞转化实验 2 E花环实验 1 大吞噬实验 3 小吞噬实验 4 淋巴细胞转化试验 ★植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）选择性刺激T细胞增殖； ★脂多糖（LPS）、葡萄球菌A蛋白（SPA）可刺激B细胞增殖； T细胞、B细胞表面具有抗原识别受体和有丝分裂原受体 美洲商陆 淋巴细胞转化试验 原理 当T淋巴细胞在体外培养时，加入PHA或ConA刺激， T淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，同时伴有DNA、RNA及蛋白质合成的增加，最终导致细胞分裂。根据其转化率可测定T淋巴细胞的功能，从而反映机体的细胞免疫功能。 DNA合成 分化 淋巴母细胞 刺激物 细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松 T淋巴细胞 未转化细胞 过渡态细胞 淋巴母细胞 转化淋巴细胞的判断标准 细胞类别 形态特征 转化的淋巴细胞 未转化的淋巴细胞 淋巴母细胞 过渡型细胞 胞体大小（直径） 10～20μm或更大 12～16μm 6～8μm ? ? 胞 核 位 置 多偏于一侧，少数位于中央 中央或稍偏 多位于中央 染 色 质 疏松，呈粒状 较疏松 致密团聚 核 仁 清晰，可见1～3个 有或无 无 有丝分裂 有时可见 无 无 ? ? 胞 浆 量 丰富，核之一侧较宽广 稍宽 较少，常呈一窄环 嗜碱性 ++++ +++～++ ++～+ 空 泡 常可见 有或无 无 伪 足 常可见 有或无 无 内容提要 大吞噬实验 3 淋巴细胞转化实验 2 E花环实验 1 小吞噬实验 4 原理 巨噬细胞对颗粒性抗原有强大的吞噬能力。常用细胞型抗原如鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等与巨噬细胞孵育，检测巨噬细胞的吞噬能力。 原理 * 大吞噬试验 鸡红细胞 大吞噬细胞 对鸡红细胞消化程度分级： Ⅰ级：未消化，鸡红细胞核清晰，着色正常。 Ⅱ级：轻度消化，鸡红细胞核模糊，核肿胀，着色淡。 Ⅲ级：完全消化，鸡红细胞核溶解，染色极淡。 结果计算 可观察鸡红细胞的消化程度，以判断巨噬细胞胞内杀伤功能。 吞噬百分比＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/所计数的巨噬细胞总数（吞噬的＋未吞噬的）×100% 吞噬指数＝100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞 临床意义 参考值：正常人吞噬百分比为60%～65%，吞噬指数1%左右 临床意义：可作为机体抗肿瘤能力的判断指标。恶性肿瘤病人吞噬百分比为34%～38%。吞噬指数为0.6%左右。有人报告，食道癌、胃癌、肠癌、乳腺癌以及其它恶性肿瘤患者的吞噬百分比都在45%以下，吞噬指数也降低。不少患者在术后有不同程度的回升，提示本试验也可作为判断肿瘤疗效及预后的一个参考指标。 内容提要 3 2 1 4 E花环实验 淋巴细胞转化实验 大吞噬实验 小吞噬实验 原理 血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞。有强大的吞噬和消化异物的功能，构成机体天然抵抗力。在机体固有免疫和适应性免疫中发挥重要的作用。对中性粒细胞的检测包括运动功能、吞噬功