(公用 教案)【优化方案】2017版高考生物大一轮复习 第十二单元 生物技术实践 第43讲 微生物的培养与应用讲义.docVIP

第43讲　微生物的培养与应用　1.微生物的分离和培养　2.培养基对微生物的选择作用　3.利用微生物进行发酵来生产特定的产物　　　　　　[学生用书P295]) 一、微生物的实验室培养培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)营养构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养氧气的要求。(3)种类：按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中所有防止杂菌污染的方法。(2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)方法大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。(2)纯化大肠杆菌关键的步骤是接种。纯化培养方法：平板划线法和稀释涂布平板法。纯化培养原理：在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落即可获得较纯的菌种。二、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素是由于它们能合成脲酶这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。以尿素为唯一氮源的培养基能促进分解尿素的细菌的生长和繁殖并抑制或阻止其他微生物的生长从而将目的菌分离。统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。实验流土壤取样→制备培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。三、分解纤维素的微生物的分离纤维素酶(1)组成：纤维素酶是一种复合酶它包括C酶、C酶和葡萄糖苷酶。(2)作用 2．菌种筛选(1)方法：刚果红染色法。(2)原理　　　　　　　　 　 纤维素分解菌　　　　　　　　　↓ →红色复合物红色消失、出现透明圈。即：使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。筛选流程土壤取样：富含纤维素的环境选择培养：用选择培养基培养以增加纤维素分解菌的数量梯度稀释涂布平板：将样品涂布于含CR的鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈(2016·北京海淀区期末)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机(√) 2．将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上分离分解尿素的细菌是否无菌操作影响较小。(√)培养基分装到培养皿后进行灭菌。(×)从有机废水中分离微生物用于废水处理时接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养。(×)外植体消毒的原则是既杀死材料表面的微生物又减少消毒剂对细胞的伤害。(√)(2015·高考四川卷T3D)用稀释涂布平板法培养计数应选择有30～300菌落数的平板。(√)(2016·山东青岛市期末)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中尿素是唯一的氮源。(√)分解尿素的细菌在分解尿素时可以将尿素转化为氨使得培养基的酸碱度降低。(×)土壤中纤维素分解菌的筛选流程中的“选择培养”是必不可少的。(×)在富含纤维素的培养基中加入刚果红染色剂(√) 考点一　培养基及微生物的纯化培养技术[学生用书P296] 1．培养基的种类(1)按物理状态分类 培养基种类 特点 用途液体培养基 不加凝固剂 工业生产 固体培养基 加凝固剂(如琼脂) 微生物分离、鉴定活菌计数菌种保藏 半固体培养基 观察微生物的运动、分类、鉴定 (2)按功能分类 种类 制备方法 原理 用途 举例 选择培养基 培养基中加入某些化学物质 依据某些微生物对某些物质的特殊需求或抗性而设计 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 培养基中加入某种指示剂或化学药品 产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用伊红—美蓝培养基鉴别大肠杆菌2.培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.5～7.5放线菌为7.5～8.5真菌为5.0～6.0培养不同微生物所需pH不同。消毒与灭菌 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消 毒法 不耐高温的液体 化学药剂消毒法 用酒精擦拭双手用氯气消毒水源 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法接种工具 干热灭 菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法 培养基及容器4.大肠杆菌的纯化(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞使(2)纯化微生物的接种方法 比较项目 平板划线法 稀释涂布平板法 关键操作 接种环在固体平板培养基表面连续划线 ①一系列的梯度稀释；　涂布平板法操作注意事项 每次划线前后均需灼烧接种环 稀释度要足够高为确保实验成功可以增加稀释度 菌体获取 在 从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体 优点 可以根据菌