第八章_微生物遗传和变异精选.ppt

4、 F ′菌株 （质粒带有部分染色体片断的菌株） 初生F ′菌株 次生F ′菌株 建议读物 基因水平转移是细菌进化的主要动力 ——《微生物功能基因组学》 作业: 在大肠杆菌中发生了基因重组现象.请用一组试验证明发生该重组的过程是转化,转导或者接合? （四）原生质体融合 通过人为方法,使遗传性状不同的两个 细胞的原生质体融合,继而遗传重组,借 以获得兼有双亲性状,遗传性稳定的融 合子的过程。 ●主要步骤： 1）选择亲本 2）制备原生质体 3）促融 4）原生质体再生 5）融合子检出 6）筛选 Metabolic engineering by genome shulffling G.Stephanopoulos Nature biotechnology 2002, 20, 666- 建议读物： 总结： §.5 菌种衰退、复壮和保藏 ●菌种衰退现象：形态、生长速度、代谢产物、致病性、抗逆性等 ●复壮：通过分离纯化和测定，从衰 退群体中筛选未退化的个体。 菌种衰退的防止： 1）减少传代次数 2）良好培养条件 3）利用不易衰退 的细胞传代 4）菌种的有效保藏 ●菌种保藏相关问题： 1．保藏条件：低温、干燥、无氧、低 营养、保护剂 2、菌种的有效管理 保藏机构：ATCC、CCTCC 、DSMZ 3、有效的保藏方法 ●常用保藏方法比较： 微生物同源重组的一般概念和模型 补充材料 同源重组： 两条同源的DNA分子，通过配对、链的断裂和再连接，而产生片断交换的过程。 双交换：两个连锁基因间发生两次交换。 ----A----B-----C----- ----a----b-----c----- 可以看作先发生a b一次交换 －－A----b－－－c－－－ －－a－－B------C------ 然后b c间再发生一次交换 　　 －－A---- b－－－C----- 　 ----a－－B－－－c－－ 基因重组的Holliday 模型 1.同源配对 2.内切酶切开单链 3.单链交换 4. 连接 5. 分支迁移 6.交联桥结构 7.旋转180° 8.形成Holliday连接体 9.上下或左右连接 10.连接 ?双链断裂修复模型 a.双链DNA b.双链断裂 c.形成缺口 d.形成D环 e.合成缺口 f.分支迁移 g.Holliday体拆分 10.两侧基因交换(右) J.W. sostak 大肠杆菌同源重组(RecBCD核酸酶) 2、营缺型的筛选 （1）三种基本培养基 ●基本培养基[-] :满足野生型菌株生长 最低营养要求的组合培养基。 ●完全培养基[+] ：满足所有营缺型菌株 生长营养要求的天然或半组合培养基。 ●补充培养基[A]，[B] ：满足相应营缺型 菌株生长营养要求的组合或半组合培养基。 （2）三类遗传型个体 ●野生型：从自然界分离获得的菌株不论 营养状况如何，均称为~。（A+B + ） ●营缺型：野生型菌株经诱变由于代谢障 碍,而必须添加某种物质才能生长的突变株。 （A+B - ） （A-B + ） ● 原养型：营缺型回复突变后的菌株。 （A+B + ） 基本基[-] 完全基[+] 补充基 [A] 野生型 + + + 营缺型 — + + 原养型 + + + （3）筛选步骤 1）诱变 2）淘汰野生型：抗生素法、菌丝过滤法 3）检出： 夹层培养法；限量补充法 逐个检出法；影印平板法