第八章生物传感器精选.ppt

第八章 生物传感器分析技术 学习目的 第一节 概述 生物传感器是由生物活性物质作为敏感元件，配以适当的换能器所构成的选择性小型分析仪器。 一、发展历史 二、生物传感器的应用 1、在医学上的应用 3、环境监测 我们只不过刚刚结束在黑暗中摸索，开始在阳光下耕作沃土。 ——Clark 三、基本组成单位 1、夹心法 定义：是将生物材料封闭在双层微滤膜、超滤膜或透析膜之间。 (1)特点 操作简单 不需要化学处理 固定生物量大 响应速度快 重现性好 适用微生物和组织膜制作 2、吸附法 定义：是在非水溶性载体上，利用载体与生物活性物质之间的范德华力、氢键、离子键等吸附力使生物材料固定的方法。 （1）常用的载体： 活性炭 高岭土 玻璃 胶原 纤维素 离子交换树脂 （2）特点 操作简便、条件温和、对生物材料的活性结构破坏较少。 结合力弱，载体的理化性质稍微改变就可能引起解吸，使生物活性物质脱落。 3、包埋法 定义：是将生物材料固定在高分子聚合物微孔中的方法。 （1）常用的合成高聚物 聚丙烯酰胺 聚氯乙烯 光敏树脂 尼龙 醋酸纤维 （2）常用的天然高聚物： 海藻酸 明胶 胶原 琼脂 （4）特点 一般不产生化学修饰，对生物分子的活性影响小，聚合物的孔径和形状可任意控制。 分子量大的分子在膜中扩散困难。 4、共价结合法 定义：是生物活性分子通过共价键与水不溶性载体结合的方法。 （2）复合载体PEI-SIO2的制备 对硅胶进行活化处理：用甲烷磺酸水溶液； CP-SIO2的制备：用γ-氯丙基三甲氧基与硅烷反应，所制产物为氯丙基化的硅胶； PEI-SIO2复合载体制备：用聚乙烯亚胺（PEI）。 （3）特点 结合牢固、分子不易脱落、载体不易降解、寿命长。 操作步骤多、酶活性受影响，所以制备高活性的固定化酶比较困难。 5、交联法 是采用双功能试剂，如戊二醛等，将生物材料结合到惰性载体上的方法。 生物材料中参与偶联的功能团有：-NH2、-COOH、-SH、-OH、咪唑基和酚基等。 （1）特点 操作简单，结合牢固，可以长时间使用。 严格控制pH，交联剂的选择也很重要。 （1）特点 条件温和，对生物活性物质的影响较小。 胶囊的稳定性一般较差。 第三节 生物传感器的分类 2、酶传感器的组成： 固定化酶膜：选择性地“识别”并催化被检测物质发生化学反应； 变换器：把催化反应中底物或产物的变量转换成电信号，通过仪表显示出来。? 3、酶传感器的应用 （1）医疗方面 用葡萄糖氧化酶制成葡萄糖传感器，可测定血液中葡萄糖浓度。 固定化葡萄糖氧化酶和L-乳酸氧化酶膜圈构成的酶电极为关键器件 。 （2）食品新鲜度检验 ① 鱼鲜度传感器 在日本、加拿大等国广泛用于鱼类鲜度的测定。鱼死后体内ATP经酶解依次形成ADP、AMP、IMP、肌苷、次黄嘌呤和尿酸。鲜度可用K值表示： K=肌苷+次黄嘌呤/ATP +ADP+AMP+IMP +肌苷+次黄嘌呤+尿酸 大多数鱼死后5～20h，ATP，ADP和AMP已分解尽，超过24h，鲜度主要取决于IMP--肌苷---次黄嘌呤---尿酸。 将这三个步骤的三种酶（5’－核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。 当K＜20时，鱼极新鲜，可供生食。 K在20～40之间为新鲜，必须熟食。 K大于40，不新鲜，不宜食用。 ② 肉鲜度传感器 肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺类测定能反映肉类的新鲜程度。 用腐胺氧化酶与过氧化氢电极构成多胺生物传感器，或用单胺氧化酶膜和氧电极组成的酶传感器测定肉在贮藏过程中的鲜度。 3、水质监测 用化学法测定酚时，硫化物、油类等可干扰其测定。 从马铃薯中提纯、经吸附交联得到的固定化多酚氧化酶与氧电极构成酚传感器，可检测大多数酚类化合物。 二、免疫传感器 1、基本原理 采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 2、必要的试剂 3、酶联免疫吸附测定法 步骤如下：??? （1）抗体（或抗原）物理性的吸附于固相载体表面； （2）抗原（或抗体）与酶偶联，形成酶标抗原（或抗体）； （3）酶标抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）结合后，然后通过酶催化底物产生颜色反应，颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例，从而实现定量测定。 4、免疫传感器在医学上的应用 （1）绒毛膜促性腺激素（hGG）的测定 免疫胶体金法是将羊抗人HCG