内生固氮菌HAUM10对水稻的侵染定殖规律及促生效应内生固氮菌HAUM10对水稻的侵染定殖规律及促生效应.doc

内生固氮菌HAUM10对水稻的侵染定殖规律及促生效应 摘要：试验以从表面灭菌的稗草中分离到的一株内生固氮菌ｈａｕｍ１０为对象，研究发现该菌具有较强的产固氮酶和吲哚乙酸能力。乙炔还原法测定其所产固氮酶的活性为０．８２４ μｍｏｌ ｃ２ｈ４／（ｍｌ·ｈ），液相色谱法测定其产吲哚乙酸量为１５．４４ μｇ／ｍｌ。将ｈａｕｍ１０用ｇｆｐ基因标记后接种水稻，观察其在水稻中的侵染定殖规律，发现在接种后第7天，ｇｆｐ标记的ｈａｕｍ１０主要定殖于根内通气组织和韧皮部细胞，少量定殖在叶鞘中。盆栽试验表明，ｈａｕｍ１０促进水稻叶绿素合成，有利于光合作用，在水稻生长后期促进氮、磷元素由叶向穗转移。 关键词：内生固氮菌；水稻；侵染；定殖；促生 infection and colonization of endophytic diazotroph haum10 on rice seedlings and its plant growth-promoting role ｔａｏ ｙａｎ－ｈｕｉ，ｌｉｎ ｈｕｉ，ｚｈａｏ ｂｉｎ （ｓｔａｔｅ ｋｅｙ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ｈｕａｚｈｏｎｇ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｗｕｈａｎ ４３００７０， ｃｈｉｎａ） ａｂｓｔｒａｃｔ： aｎ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈ ｈａｕｍ１０ ｗａｓ ｏｒｉｇｉｎａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｕｒｆａｃｅ－ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｅｃｈｉｎｏｃｈｌｏａ ｃｒｕｓｇａｌｌｉ and it ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｐｐｒｅｃｉａｂｌｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉａａ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ． ｔｈｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ（ａｒａ） ｗａｓ ａｂｏｕｔ ０．８２４ μｍｏｌ ｃ２ｈ４／（ｍｌ·ｈ）． ｔｈｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ determine the ｉａａ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｕｍ１０ which was detected as ｕｐ ｔｏ １５．４４ μｇ/ｍl． ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｂｙ ｇｆｐ－ｔａｇｇｅｄ ｈａｕｍ１０ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ． ｈａｕｍ１０－ｇｆｐ ｗａｓ ｍａｉｎｌｙ ｃｏｌｏｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ａｅｒｅｎｃｈｙｍａ ａｎｄ ｐｈｌｏｅｍ ａｔ the 7th day ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ； while a few was ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅａｆ ｓｈｅａｔｈ． ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ｈａｕｍ１０ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ the ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｄ ｔｈｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｆｒｏｍ ｌｅａｆ ｔｏ ｓｐｉｋｅ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｒｉｃｅ． ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈ； ｒｉｃｅ； ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ； ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ； ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ 水稻生长过程除了需要大量的水外，氮源是其最重要的生长因子。中国是世界上稻米的主要生产国和消费国之一，目前化肥是实现单位面积高产的重要因素之一，但中国占世界约７％的耕地面积中施用的氮肥高达全球氮肥总用量的３５％以上［１］。氮肥进入灌溉稻田后，通过氨的挥发、硝化－反硝化作用、表面流失等多途径损失，最终导致氮肥利用率降低。大量氮素损失导致一系列环境问题：地下水污染和江河湖泊的富营养化；饮用水中硝酸盐浓度高于１０ ｍｇ／ｌ将导致婴儿高铁血红蛋白症和成人胃癌；ｎ２ｏ和ｎｏ的排放可能导致全球气候变暖［２］。生物固氮不仅可以为植物提供氮源缓解施用化肥带来的一系列危害，而且具有环保、高效、节能、高效等优点，因此研究利用生物固氮的方式为水稻提供氮源具有极其重要的意义。 植物内生菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的微生物，被感染的宿主植物不表现出外在症状，可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接扩增出微生物ｄｎａ的方法来证明其内生性［３］。内生菌对宿主植物的促生效应包括固氮、解磷、分泌植物激素、促进矿质元素吸收、生物防治等［４］。植物内生固氮菌（ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｄｉａ