仪器分析课件..docVIP

化验工培训教材 一、吸光光度法 定义：吸光光度法是采用分光器（棱镜或光栅）获得纯度较高的单色光，是基于物质对单色光的选择性吸收测定物质组分的分析方法。（吸光光度法就是基于这种物质对电磁辐射的选择性吸收的特性而建立起来的，它属于分子吸收光谱。） 特点：吸光光度法具有灵敏度高、准确度和稳定性较好、适用范围广、所需仪器简单价廉等优点。它通常用于微量组分的测定，是业内广泛采用的分析手段。 1.1 紫外与可见光吸收光谱的形成 原子或分子中的电子，总是处在某一种运动状态之中。每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级，这些电子由于各种原因（如受光、热、电）的激发，从一个能级转到另一个能级，称为跃迁。 当这些电子吸收了外来辐射的能量从一个能量较低的能级跃迁到一个能量较高的能级时都对应着吸收一定的能量辐射，具有不同分子结构的各种物质，有对电磁辐射显示选择吸收的特性，正像我们在光度分析中经常见到的，有色物质的溶液对不同波长的入射光线有不同程度的吸收。 吸光光度法就是基于这种物质对电磁辐射的选择性吸收的特性而建立起来的，它属于分子吸收光谱。分子吸收光谱形成中所吸收的能量与电磁辐射的频率成正比。 1.2 吸光光度法的基本原理 朗伯-比尔定律 有色溶液对光的吸收程度，与该溶液的液层厚度、浓度以及入射光的强度等因素有关。如果保持入射光的强度不变，则光吸收程度与液层厚度及溶液的浓度有关，其定量关系式为： A=Kcb 此式称做朗伯-比尔定律。它是吸光光度分析的基本原理。这个关系式仅适用于单色光及均匀非散射的液体、固体和气体。 1.3 分光光度计的组成 分光光度计的组成：光源、单色器、吸收池、检测器 1.光源：可见光区（320nm-2500nm）常用钨灯作光源，紫外光区（200nm-375nm）常用氢灯，氘灯作光源。 2.单色器：将光源发射的复合光分解为单色光的装置。主要元件为色散器，常用的色散原件是光栅和棱镜。 3.吸收池：盛放样品溶液的容器，具有两个平行透光且具有精确厚度的平面。玻璃吸收池用于可见光区，石英吸收池用于紫外光区。 4.检测器：是一种光电转换设备。将光强度转换为电信号显示出来。常用的有光电池，光电管或光电倍增管。 1.4 分光光度法的误差 1.方法误差：溶液偏离比尔定律及溶液中的干扰物质影响所引起的。 1）溶液偏离比尔定律：要求C≤0.01摩尔/升 2）反应条件的改变：如溶液的酸度，温度，及显色时间引起有色配合物组成发生变化，使溶液颜色的深浅发生变化而引起的误差。 2.仪器误差：所使用的分光光度计引入的误差。 1）、仪器噪声的影响。 2）、反射和散射引起的误差。 3）、吸收池的误差。 4）、仪器的非理想性引起的误差。 1.5 分光光度法中共存离子的干扰及消除 干扰的原因：溶液中其他成分影响被测组分吸光度值时就形成了干扰 干扰离子的类型： 1）与试剂形成有色配合物 2）干扰离子本身具有颜色 3）与试剂反应，产生的物质虽然无色，但会消耗大量的显色剂，是被测离子显色不完全。 4）与被测离子反应产生较稳定的络合物，使显色剂无法与被测离子反应。 消除干扰的一般方法： 1）控制溶液的酸度 2）加入掩蔽剂 3）利用氧化还原反应 4）选择适当的参比溶液 5）选择适当的波长 6）选择合适的分离方法消除干扰离子 7）利用导数光谱法、双波长法等新技术来消除干扰 1.6 使用分光光度法的一般步骤 1、确定方法的原理。 2、仪器和试剂。 3、选择合适的测定条件。 绘制吸收曲线选择测定波长，确定测定波长。 绘制吸光度与显色时间的曲线，做有色溶液稳定性实验 绘制吸光度与显色剂用量曲线，确定显色剂用量。 绘制吸光度与pH值的曲线，确定pH值的影响。 4、工作曲线的绘制及结果的测定。 1.7 分光光度法测定中注意事项 1.“7230”分光光度计在使用过程中，消光值不稳定的是什么原因，如何处理？ 主要原因有： 1）预热不充分，应预热20分钟后使用。 2）连续使用时间过长，连续工作2小时应停机一段时间后在使用。 3）光电管暗盒内硅胶受潮，需更换或烘干硅胶。 4）稳定电源失灵，请仪表工检修损坏元件。 5）比色槽定位不精确，每次安放比色皿移位不一致，需重新校正比色槽安装部件。 6）光源灯松动或将坏，需更换灯。 2.分光光度计为什么要进行波长校正，如何进行？ 进行波长校正的原因是： 1）波长读数不准确，所测最大吸收波长也不准确，影响测定灵敏度， 2）仪器由于搬迁震动，检修（如更换灯泡）和气温变化或新购置的仪器，均需要进行波长校正，这些过程均可以造成仪器各元件位置和状态的改变，引起波长偏移。 校正方法如下： 转动单色器，同时将一张白纸放在狭缝前观察出射光颜色，当波长转到580纳米左右白纸上应有黄色光斑，否则就加以调整。 3