10核酸代谢-1(精)介绍.ppt

10 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 荣获1978年诺贝尔生理学或医学奖限制性核酸内切酶的发现及其在分子遗传学中的应用 限制性内切酶的命名原则 用属名的第一个字母和种名的头两个字母组成3个字母的略语表示寄主菌的物种名。 用一个大写字母表示株名。如Ecok, EcoR。 如果一种特殊的寄主菌内有几种不同的限制与修复系统，用罗马字母表示。如EcoR I，EcoR V。 常用的DNA限制性内切酶的专一性 * * * * * * 10.1 核酸的酶促降解(理解) 10.2 核苷酸的分解代谢(难点) 10.3 核苷酸的生物合成(难点) 10.1　 核酸的酶促降解 一、食物中核酸的吸收利用 二、细胞内核酸的酶促降解 三、核酸酶 核蛋白摄取 　HCl 蛋白质　　　　　　　核酸 胃蛋白酶 胃 多肽 氨基酸+短肽 进入小肠 核酸 核苷酸 核酸酶 核苷酸酶 核苷+磷酸 核苷磷酸化酶 碱基+戊糖-1-磷酸 小肠 各种多肽酶 小肠粘膜 绒毛 一、食物中核酸的吸收利用 外源性核酸不可能直接被人体细胞吸收利用，人体细胞中的核酸都是自己合成的！ 二、细胞内核酸的酶促降解 由于细胞的衰老，或者是病毒、细菌等，都会 一是对外源DNA或RNA进行识别和降解，如病毒、细菌的DNA或RNA或使随机整合到宿主细胞基因组内的病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因的沉默，即RNA干扰（RNA interference, RNAi）。 二是细胞自身遗传物质代谢。细胞中RNA含量变化显著，DNA含量相对稳定，但都不是恒定不变的。 按底物专一性分 核糖核酸酶(RNase) 脱氧核糖核酸酶(DNase) 非特异性核酸酶 按作用键分 水解3’-磷酸酯键 水解5’-磷酸酯键 三、核酸酶 （一）核酸酶的分类： 按切割位点分 核酸内切酶 核酸外切酶 内外兼切核酸酶 （二）核酸外切酶： 非特异性的作用于DNA单链或RNA的磷酸二酯键 OH 5′ p p p p B p p p p B B B B B B B 牛脾磷酸二酯酶（ 5′端外切5得3）, 主要得 3′-核苷酸。 蛇毒磷酸二酯酶（ 3′端外切3得5）, 主要得 5′-核苷酸。 3′ 3′ 5′ （三）内切核酸酶：特异性强 　1、核糖核酸酶（RNase)　　　 作用于嘧啶核苷酸的磷酸二酯键，生成末端为嘧啶核苷-3‘-P 作用于鸟苷酸二酯键，生成末端为鸟苷-3‘-磷酸 OH Pu ： 嘌呤 purine Py：嘧啶pyrimidine 5′ p p p p Py Pu Py Py p p p A C G U p p p G A 3′ RNase I (牛胰核酸酶) RNase T1 (曲霉中分离) 3′ 5′ （三）内切核酸酶： 2、脱氧核糖核酸酶（DNase） （1）DNase I：破坏单链或双链DNA中核苷酸之间的磷酸二酯键，产生5‘- P末端和3‘- OH末端。在Mg2+存在时，能在双链DNA上随机地产生切口；而在Mn2+存在下能将双链DNA同时切断，使DNA片段化。 （2） DNase Ⅱ：破坏单链或双链DNA中核苷酸之间的磷酸二酯键，产生5‘-OH末端和3‘-P末端。 （四）内外兼切核酸酶： 既可内切也，可外切。 1、核酸酶P1：裂解RNA和DNA中的3’-5’磷酸二酯键（双链底物的水解速度非常缓慢），同时具有 3‘-核酸磷酸酶活性, 可水解3’-单核苷酸和寡核苷酸上的3‘-磷酸单酯键，最终主要生成5‘-单核苷酸。 利用核酸酶P1对核酸的特定作用，通过酶法生产5‘-单核苷酸，是生产核苷酸技术中最成熟的方法。 5′ p p p p B p p p B B B B B B B 3′ 3′ 5′ p （四）内外兼切核酸酶： 既可内切也，可外切。 2、核酸酶Bal31：既具有单链特异的核酸内切酶活性，同时也具有双链特异的核酸外切酶活性。 20世纪70年代，在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶，其能专一性地识别并水解外源DNA链。当外源DNA侵入细菌后，此酶可将其水解成片段，限制外源DNA在细菌细胞内的表达，而细菌本身的DNA由于在该特异核苷酸顺序处被甲基化酶修饰，不被水解，从而得到保护，故称这种酶为限制性核酸内切酶（restriction endonuclease，简称限制酶）。 1、概念： （五）限制性内切酶（ristriction endonuclease） 细菌如何避免自我降解 细菌除具有限制酶（Restriction) 外，还具有一种对自身DNA起修饰作用的修饰酶（Modification） 。一种限制酶和其相应的修饰酶对底物DNA的识别和作用的部位是相同的。 修饰酶使该部位