2015-2016学年2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课时2浅析.pptVIP

* . . . * . . . * . . . * . . . * . . . 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 专题2 微生物的培养与应用  1.对土样的选取和选择培养基的配制 2.应用稀释涂布平板法对细菌进行计数 首先复习上一课时已经学习了的分离微生物并对其计数的研究思路，接下来按照实验的一般步骤将思路付诸于行动：制备选择培养基、土壤取样、样品的稀释与涂布、培养与观察并计数计算，边学习、边讨论，到底该怎么操作，操作时要注意哪些问题？ 有条件的可以带领学生进行类似的实验。这里主要是通过讲解与讨论结合视频的直观性让学生掌握选择培养基的配制，稀释涂布平板法对细菌计数的一般过程以及结果的处理和评价。 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2) 脲酶 + CO2 NH3 + H2O （一）筛选菌株 一、研究思路 选择培养基 （二）统计菌落数目 （三）设置 对照 活菌计数法（稀释涂布平板法） （一）制备培养基 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 二、实验的具体操作 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2) 脲酶 + CO2 NH3 + H2O KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数——步骤一 （一）制备培养基 （二）土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 二、实验的具体操作 （一）制备培养基 （二）土壤取样 二、实验的具体操作 （三）样品的稀释 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数——步骤二 ◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 （三）样品的稀释 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。 原因：不同微生物在土壤中含量不同。 例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 （四）取样涂布 （五）微生物的培养与观察 不同类型的微生物形成的菌落往往有差别---微生物分类依据 （五）微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 三、操作提示 无菌操作 做好标记 规划时间 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数——步骤三 1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。 四、结果分析与评价 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。 五、课外延伸 研究思路 菌种筛选 统计菌落菌数目 设置对照 土壤中分解尿素的分离与计数 操作提示 结果分析与评价 课外延伸 样品稀释 实验设计 涂布平板 培养观察 土壤取样 1.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均与下图中的链霉素带接触)，将平板置于37℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是(　　) A．链霉素能阻止结核菌的生长 B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效 C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D．