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Presented by Steven Cheung 液相色谱基础知识简介 色谱法简介 色谱法的历史 色谱法的原理 色谱法的分类 HPLC简介 液相色谱图术语解释 什么是色谱 色谱法的简称(又叫色层法,层析法),其本质是一种分离分析方法 常见的分离方法 – 蒸馏 – 离心 – 电泳 – 过滤 – 超滤 – 色谱：目前最有效的分离方法 Chromatography的由来 100多年前俄国植物学家Tswett分离植物色素时采用的实验方法，他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带 Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验方法，即现在的Chromatography(色谱法) Chromatography的发展 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 -主要是气象色谱的应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代 Chromatography的原理 – 是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离 – 两相中有一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase),有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase),流动相又叫洗脱剂,溶剂 相(Phase): – 物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相之间有明显可分的界面 Chromatography的原理 分离是一个物理过程。 固定相(Stationary Phase) 流动相(Mobile Phase) 进样 (Injection) 洗脱 (Elution) 相互作用(Interaction) 色谱法的分类 按分离过程的机理分: 吸附色谱(Absorption Chromatography) –根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离 分配色谱(Partition Chromatography) –分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同 离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography) –根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC) 体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography) GPC(Gel Permeation Chromatography) –固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂 GFC(Gel Filtration Chromatography) – 固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液 色谱法分类示意图 液相色谱的分类 按流动相和固定相的相对极性分: 正相色谱(Normal Phase Chromatography)：固定相的极性大于流动相 反相色谱(Reversed Phase Chromatography)：固定相的极性小于流动相 有机化合物的极性：分子间作用力(静电引力,偶极力,色散力,氢键力…)综合表现的一种描述 常见有机溶剂的极性示例 高效液相色谱简介 高效液相色谱法 HPLC (High Performance Liquid Chromatography ) –是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器… HPLC 流程 液相色谱图名词术语 色谱峰(Peak):色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号 峰底(Peak Base):峰的起点与终点之间连接的直线 峰高(Peak Height):峰最大值到峰底的距离 切线峰宽(Peak Width):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离 半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两侧相交两点之间的距离 液相色谱图名词术语 峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差(σ)(Standard Error):0.607倍峰高对应峰宽的一半 拖尾峰(Tailing Peak):后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰(Leading Peak):前沿较后沿平缓的不对称峰 鬼峰(Ghost Peak):并非由试样所产生的峰,亦称假峰 液相色谱图名词术语 基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号 基线飘移(Baseline Drift):基线随时间定向的缓慢变化 基线噪声(N)(Baseline Noise):由各种因素所引起的基线波动 谱带扩展(Band Broadening):由于纵向