高效液相色谱的使用.ppt

大孔径填料适用于大分子分析 大孔径300? 全多孔色谱柱 可用于分离蛋白质和多肽 分子量虽小但hydrodynamic volume(水动力学体积)较大的分子 Poroshell 色谱柱 高流速下, 高柱效分析大分子的蛋白质和多肽 300? 孔径可改善蛋白质和多肽峰形 300? 孔径可改善大分子的峰形 液相柱---保留值与pH的关系 液相柱---保留值与pH的关系 液相柱---保留值与pH的关系 液相柱---保留值与pH的关系 液相柱---保留值与pH的关系 复杂组分的流动相pH选择技巧 Zorbax?色谱柱发展史 1973 ZORBAX SIL 发明专用于HPLC分离的球状、小颗粒硅胶(专利) 1977 ZORBAX ODS 单官能团, 单层键合相发明者之一 1978 ZORBAX column 首先推出色谱柱的质量信誉保证 1982 ZORBAX GF-250 改善了蛋白质尺寸分离的稳定性 1987 ZORBAX Rx-SIL 推出适合碱性化合物的HPLC分离的全新硅溶胶技术(专利) 1990 ZORBAX StableBond 增强了低pH条件下键合相的稳定性(专利) 1996 ZORBAX Eclipse XDB 双封端技术提高了中等pH条件下键合相的稳定性(专利) 1997 Zorbax LC/MS column 15和30 mm(3.5um)快速, 高分辨率, 高通量LC/MS色谱柱 1998 ZORBAX Bonus-RP 极性键合技术使碱性化合物的分离得到改善(专利) 1999 ZORBAX CombiHT 专为小规模组合化学样品制备设计的高通量色谱柱 1999 ZORBAX Eclipse dsDNA 用于分析双链DNA的多孔硅胶柱 1999 ZORBAX Carbohydrate 分析单, 双, 三糖和糖醇的专用柱 1999 Zorbax Extend C18 独特宽pH跨度, 高pH下使用的硅胶基质色谱柱(专利) 2001 Zorbax SB-aq 可在低pH下(1~8)使用100%水相的填料(专利) 2002 Zorbax Poroshell 300SB 蛋白质高速, 高效反相分离新填料 2002 ZORBAX 3.0mm 内径. 3-mm 柱径溶剂节省柱 2003 ZORBAX sub 2 micron 1.8um粒径的高通量, 超高速色谱柱 (5月1日上市) 2003 ZORBAX PrepHT 高通量全系列制备柱---分析柱向制备柱直接放大 (6月1日上市) Zorbax 产品系列 Zorbax色谱柱=高柱效 +长寿命 色谱柱柱内体积和平衡时间 冲洗色谱柱---用比流动相更强的溶剂 HPLC常用的色谱柱接头 HPLC常用的色谱柱接头 活塞杆与密封圈 活塞杆与密封圈 检测器用灯 检测器用灯 检测器用灯 DAD的氘灯替代VWD的氘灯 1. DAD的氘灯替代VWD的氘灯 关闭灯电源, 冷却5min以上 将lamp设定的VWD configuration的灯类型改为2140-0590 2. 灯能量测试 以水为流动相 灯预热10min以上 在化学工作站Diagnosis状态下进行波长校准, 将紫外灯的使用时间归零 样品溶剂溶解强度 中性分析时为何要使用缓冲液？ 增加缓冲液浓度减少拖尾 TEA对碱性成分峰形的影响 竞争酸对酸性组分的峰形的影响 液相分析-小诀窍 提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度） 减小柱内径，可增加柱效（提高灵敏度） 缩短检测器响应时间，可增加柱效（提高灵敏度） 减小柱外体积，可增加柱效（提高灵敏度） 使用超纯硅胶，可增加柱效（提高灵敏度） 使用高能量氘灯，可增加柱效（提高灵敏度） 使用中孔透光氘灯，可增加柱效（提高灵敏度） 改变流动相pH ，可增加柱效（提高灵敏度） 改变有机相% ，可增加柱效（提高灵敏度） 改变键合相 ，可增加柱效（提高灵敏度） 改变有机添加剂 ，可增加柱效（提高灵敏度） 改变流动相配比方式 ，可增加柱效（提高灵敏度） Acidic compounds sometimes also have 色谱峰峰形 problems, especially with very low ionic strength 流动相s. Just as with basic compounds, where you add a competing base to reduce 拖尾峰ing, with acids you can add a co