3物理图绘制概述.ppt

均一脉冲电泳 3.2 基于克隆的基因组作图---大分子DNA的克隆 基于克隆的基因组作图：根据克隆的DNA 片段之间的重叠序列构建重叠群(Contig)， 绘制物理连锁图。 噬菌体P1载体：与λ载体相似，将天然噬菌体基因组中的一段区域缺失，容量达125kb 细菌人工染色体BAC：由大肠杆菌中F质粒衍生，容量达300kb，单拷贝复制，稳定，不会因重组发生嵌合 P1人工染色体PAC：结合P1载体和BAC载体的优点 指纹作图 限制性带型指纹：用不同限制性酶处理样品，凝胶分析，DNA条带有部分相同，说明它们含有重叠的序列 重复序列DNA指纹：不同克隆酶解电泳，转移到杂交膜中，用一种或几种基因组范围的重复序列作为探针杂交，出现相同的杂交带型，说明重叠 重复序列DNA PCR：设计与重复序列互补的引物，对检测的克隆进行PCR扩增，相同的产物，说明重叠 STS目录作图：STS是已知的单一序列。设计引物，对大量的单个克隆进行PCR扩增 酵母基因组遗传图与物理图的整合 原位杂交的操作 染色体分裂细胞 染色体变性 检测信号 早期的原位杂交用的标记是放射性标记，但放射性标记很难同时满足灵敏度和分辨率两个原位杂交的必要条件。 20世纪80年代发展起来的荧光标记解决了这一矛盾。 为了得到高灵敏度，探针的标记量要尽可能大一些，以往的