第三章定点突变与重组蛋白表达精讲.ppt

第三章  基因重组 与定点突变 (A) 5 add-on mutagenesis. Primers can be modified at the 5 end to introduce 加到PCR引物5‘端的序列掺入到PCR产物的末端。一个PCR扩增片段可与另一个PCR扩增片段上的序列相重叠，其后的反应中，这段重叠序列可以作为引物被DNA聚合酶所延伸，由此产生一个新的重组分子。 非生产链 生产链 取代突变 缺失突变 插入突变 几点补充： 重叠延伸反应中非生产链的命运？ 重叠延伸反应进行基因剪接，其不同部位在反应中执行不同功能 引导区(priming region):寡核苷酸3’端 重叠区(overlap region):寡核苷酸5’端 插入区：重叠区和引导区之间 盒式突变 （cassette mutagenesis), 又称片段取代法 （DNA fragment replacement) 关键 1.目标基因序列中有适当限制酶切位点 2.如何得到各种合适的用以取代目标基 因中特定DNA片段的突变DNA片段 三. 区域性定向突变 四. 随机突变（random mutagenesis) 当缺乏目的基因序列的详尽资料时，定点突变就受到限制，此时可利用随机突变。 待突变基因克隆到载体上，其下游紧接两