第12章 液相色谱法课件.pptVIP

第三章 高效液相色谱法High Performance Liquid Chromatography 目 录 3-1 高效液相色谱特点与仪器 3-1-1 高效液相色谱仪 3-1-2 高效液相色谱法的特点 3-1-3 流程及主要部件 2.主要部件 (2) 梯度淋洗装置 (3) 进样装置 (4) 高效分离柱 (5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器 d. 荧光检测器 3-2 基本原理与主要分离类型 3-2-1 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 3-2-2 液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatography 3-2-3 离子交换色谱ion-exchange chromatography 3-2-4 离子色谱 ion chromatography 3-2-5 离子对色谱 ion pair chromatography 3-2-6 尺寸排斥色谱size- exclusion chromatography 3-2-6 亲和色谱 Affinity chromatograph 3-3 固定相与流动相 3-3-1 液相色谱固定相 （3）化学键合固定相 化学键合固定相的特点 2. 液-固吸附分离固定相 3. 离子交换色谱分离固定相 4. 空间排阻分离固定相 3-3-2 液相色谱流动相 2. 流动相类别 3. 流动相选择 4. 选择流动相时应注意的几个问题 3-4 影响分离的因素 3-4-1 影响分离的因素 2.流速 3-4-2 分离类型选择 3-4-3 HPLC的应用 2. 稠环芳烃的分析 3-4-4 液相制备色谱 2. 液相制备色谱的方法 3. 制备型液相色谱 3-5 离子色谱法 3-5-1 离子色谱法原理 1. 离子色谱法原理 2.离子色谱具有以下优点 3-5-2 离子色谱装置类型 离子色谱连续抑制装置图 离子色谱连续抑制原理图 3-5-3 离子色谱的应用 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N （1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱； 存在着双重分离机制： (键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； 种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等； 结构类型：全多孔型和薄壳型； 粒度：5～10 μm； 结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为担体，表面涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键合型（键合离子交换基团） 树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸性、弱酸性） （2） 阴离子交换树脂（强碱性、弱碱性） （1）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构； 水为流动相。适用于常压排阻分离。 （2）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶； 非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂 （3）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等； 化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用。 可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。 1. 流动相特性 （1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯