第14章 DNA的生物合成课件.ppt

重组修复 14.6.3 DNA损伤的修复 跳过损伤部位 新链产生的缺口由母 链通过重组方式弥补 原损伤部位并没有切除，但在后代逐渐稀释。 SOS修复 这是一种在DNA分子受到较大范围损伤并且使复制受到抑制时出现的修复机制。 在E. coli，各种与修复有关的基因，组成一个称为调节子(regulon)的网络式调控系统。 这种修复特异性低，对碱基的识别、选择能力差。通过SOS修复，复制如能继续，细胞是可存活的。然而DNA保留的错误较多，导致较广泛、长期的突变。 14.6.3 DNA损伤的修复 14.6.3 DNA损伤的修复 进化、变种、癌症、诱变育种等都是基于这一机理 诱导校对能力差的DNA聚合酶形成局部“乱配” 14.7 基因重组和克隆 基因重组（gene recombinant）： 由不同DNA链的断裂和连接而产生的DNA片段的交换和重新组合并形成新的DNA分子的过程。 接合作用 (conjugation) 转化作用 (transformation) 转导作用 (transduction) 转 座 (transposition) 同源重组 (homologous recombination) 位点特异的重组(site-specific recombination) 克隆（clone） 来自同一始祖的相同副本或拷贝的集。获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning)，即无性繁殖。 基因克隆（gene clone）： 在体外对DNA按照即定目的和方案进行人工重组，将重组DNA导入靶细胞进行扩增以获得目的基因的大量拷贝的过程。 14.7 基因重组和克隆 基因克隆的技术——DNA重组技术（DNA recombinant technology） 14.7 基因重组和克隆 基因工程（genetic engineering）： DNA重组技术的产业化设计与应用，包括上游的DNA重组技术和下游的基因工程菌或细胞（生物体）的大规模培养、基因产物的分离纯化及其应用等。 Stanley Cohen Herb Boyer 1986年Nobel生理医学奖 14.7 基因重组和克隆 基因克隆的基本过程 分 分离目的基因和载体基因 切 限制酶切目的基因与载体 接 拼接重组体 转 转入受体菌 筛 筛选重组体 基因载体 为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。 常用载体 质粒DNA 噬菌体DNA 病毒DNA 14.7 基因重组和克隆 质粒（plasmid）：是独立于染色体以外的能自主复制的、并能稳定遗传的双链闭合环状DNA分子。 14.7 基因重组和克隆 目的基因 重组DNA 重组DNA的转化/转染 重组体的筛选与鉴定 重组体的表达 分析与开发应用 载体 14.7 基因重组和克隆 萤火虫的荧光素基因 在烟草中表达 人生长素基因被导入并整合到右边小鼠的基因组中 番茄工程植株具有抗昆虫幼虫的能力 DNA复制的特点：半保留复制、半不连续复制、需要引物、复制起点与方向、复制有关的概念； DNA复制的条件：底物、模板、引发体、DNA聚合酶、DNA复制有关的酶和蛋白因子； DNA复制的过程：起始、延伸与终止、 DNA复制的保真性； 端粒DNA的合成：端粒酶和端粒的合成机制； 逆转录作用：反转录酶和逆转录过程； DNA的损伤与修复： DNA的损伤、引起损伤的因素、光复活修复、切除修复、重组修复、SOS修复。 中心法则：DNA通过复制将遗传信息由亲代传递给子代；通过转录和翻译，将遗传信息传递给蛋白质分子，从而决定生物体的表现型。DNA的复制、转录和翻译过程就构成了遗传学的中心法则(DNA处于生命活动的中心）。 反中心法则：在RNA病毒中，其遗传信息贮存在RNA分子中，遗传信息的流向是RNA通过复制，将遗传信息由亲代传递给子代，通过反转录将遗传信息传递给DNA，再由DNA通过转录和翻译传递给蛋白质。 * * * * 提出问题——做个生活的有心人，多问为什么？ 科学假说——根据已知的科学理论和科学事实，对所研究的自然现象及其规律性提出的一种假定性的解释和推理，是自然科学理论思维的一种重要形式。 实验验证——实践是检验真理的唯一标准，生物是一门实验科学 实验设计非常重要 * * * * * * 按碱基配对原则 ； DNA聚合酶的作用 (错配率10-4~10-5)： 对配对碱基的识别作用（选择正确的碱基参入到引物末端）； 对底物的识别作用（先识别引物最后一个碱基是否正确，后识别参入的dNTP是否正确）； 校正阅读； RNA引物最终被切除，提高了复制准确性； 复制完成后，特定的修复酶系统对错配碱基进