ODHC在谷氨酸合成中的作用题稿.pptVIP

ODHC在谷氨酸合成中的作用 In 1971, Shingu 和 Terui 报道了在短杆菌SP上发现生物素有限的条件下ODHC的活性比生物素丰富的条件下要低。 Kawaharaet al. (1997) measured activities of ODHC as well as isocitrate dehydrogenase (ICDH——异柠檬酸脱氢酶) and glutamate dehydrogenase (GDH——谷氨酸脱氢酶) of C. glutamicum,both of which are located at the 2-oxoglutarate branch point, during glutamate production under biotin limitation, Tween 40 addition, and penicillin（青霉素） addition conditions. The activities of ICDH and GDH did not change significantly,but that of ODHC decreased(降低) during glutamate production under these three conditions. 实验结果表明，谷氨酸的过量生产与TCA循环到谷氨酸生产的代谢流有关系，降低ODHC蛋白的活性使得TCA循环的代谢流量减少， ODHC在谷氨酸的合成中起重要的作用。 * START QQ:563051596 ODHC 2-oxoglutarate dehydrogenase complex（a-酮戊二酸脱氢酶复合物）由三个亚基构成: 2-oxoglutarate dehydrogenase（a-酮戊二酸脱氢酶——E1o由odhA基因编码), dihydrolipoamideS-succinyltransferase（二氢硫S-琥珀酰转移酶——E2o由sucB基因编码)and dihydrolipoamide dehydrogenase (二氢硫脱氢酶——E3由lpd基因编码) 1994年，Nakazawa 通过亚硝基胍诱变获得了ODHC活性比出发菌低10——1000倍的突变株，并且发现这些突变株在过量的生物素条件下产谷氨酸的能力高于出发菌。 那么问题来了： 在以上三种条件下ODHC的活性为何会降低？我们来看看 DtsR，PknG，和OdhI三个蛋白的作用和可能性关系。 DtsR1蛋白 DtsR蛋白是乙酰辅酶A（乙酰CoA）羧化酶复合体的组分之一，乙酰CoA羧化酶复合体是参与脂肪酸合成的生物素结合酶，它由生物素结合亚基和羧基转移酶亚基构成。在dtsR1基因下游发现了dtsR2基因，近来又发现了与以上两个基因同源的，被称为 accD3 和 accD4, 并确定了它们在谷氨酸棒杆菌基因组中的位置(Gande et al. 2004; Portevin et al. 2005)，它们共同参与了细胞壁中分枝菌酸(分枝杆菌细胞壁的主要成分之一)和脂肪酸的生物合成。 DtsR1蛋白和谷氨酸合成密切相关，在添加表面活性剂（如吐温-40）、生物素限量等谷氨酸合成诱导条件下，DtsR1蛋白的表达量明显下降，（但添加青霉素并不能使的DtsR1蛋白的表达量下降，但是会使的ODHC的活性下降，这里面的原因并不是非常清楚）因而推测DtsR1蛋白的减少与谷氨酸的过量合成密切相关。将dtsR1基因敲除后，发现α－酮戊二酸脱氢酶复合体（ODHC）活性下降了30％，ODHC活性的下降使代谢流充分流向谷氨酸合成方向，因此推论DtsR1蛋白是通过影响ODHC活性间接影响谷氨酸合成途径的。 Protein Kinase G (PknG-蛋白激酶G) Niebisch et al. (2006) found a novel protein kinase, PknG, regulating ODHC activity via the phosphorylation(磷酸化) of OdhI protein。C. glutamicum pknG mutant could not utilize glutamine as sole carbon and nitrogen source and the intracellular level of glutamate was twice as high in the ?pknG mutant than in the wild type, indicating that the ?pknG mutant has a defect in glutamate catabolism(敲出pknG 基因使的菌体不能利用