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第四章 植物细胞全能性 与器官发生 第一节 细胞全能性的 认识过程 有性繁殖:经雌、雄配子的结合,形成合子。合子经过有丝分裂发育成胚,胚经过细胞分裂和分化而形成器官。再通过各部器官的发育,最终形成具有完整结构的植物体。 无性繁殖:这类植物的繁殖不经过雌、雄配子的结合,而是用其母体的一部分来进行繁殖。 例如: (1)大蒜的分瓣繁殖、唐菖蒲子球繁殖; (2)马铃薯的茎芽繁殖、草莓扦插繁殖、葡萄的压条繁殖、菊花的芽插繁殖; (3)枣树的断根繁殖、秋海棠的叶片繁殖、百合的鳞片繁殖。 上述例子虽然都是无性繁殖,但繁殖方式各有不同: (1)利用原有的芽和根来繁殖,如大蒜、唐菖蒲(球根); (2)利用原有芽; (3)既无芽又无根也能繁殖成植株,如秋海棠叶器官再生、枣树根部伤处形成愈伤组织再分化成株。 在自然界再生作用的启迪下,1902年德国植物学家Haberlandt根据细胞理论,大胆地提出:高等植物的器官和组织,可以不断地分割,直至单个细胞的观点。并且预言,“植物的体细胞在一定条件下,可以如同受精卵一样,具有潜在发育成植株的能力”。1958年Steward和Shantz以胡萝卜根韧皮部细胞,经液体震荡培养而得到完整的小植物,并开花结实。实验结果震动很大,惊奇之所在是在实验室里,能使一个普通的营养细胞(体细胞)发育成为一个完整的植物体。首次证明了植物细胞具有发育成植株的潜在能力。这种潜在能力就是“细胞全能性”。 1964年印度德里大学Guba和Maheshwari,在培养毛叶曼陀罗花药时,得到由小孢子发育而来的小植物,1966年经过细胞学鉴定是单倍体。这一结果证明生殖细胞和体细胞一样,在离体条件下也能表现其发育成完整植物体的潜在能力。 植物细胞“全能性”的概念 植物: 只要具有一个完整的膜系统和一个有生命力的核,即使是已经高度成熟和分化的细胞,也还保持着回复到分生状态的能力。只有像核业已开始解体的筛管和木质部成分,或细胞壁厚于2微米的纤维细胞(成熟的管胞壁厚达7微米),才不能再进行分裂。按照Gautheret(1966)的看法,一个细胞向分生状态回复过程所能进行的程度,取决于它在原来所处的自然部位上已经达到的细胞和生理状态(图4.1)。 离体培养条件下的植物细胞全能性的实现 途径涉及3个周期 有3种方式 可获得5种不同性质的植物体 离体培养技术在细胞全能性实现和利用中的作用植物细胞全能性是通过生命周期(A)、细胞周期(B)和组织培养周期(C)来实现(图3—1)。 A循环(生命周期):表示以孢子体和配子体的世代交替来实现细胞全能性。 B循环(细胞周期):表示细胞所决定的核质周期。由于核质的互相作用,DNA复制,转录mRNA并翻译为蛋白质,使细胞全能性得以形成和保持。 C循环(组织培养周期):表示器官、组织和细胞与供体失去联系。在无菌条件下,依靠完全人工合成培养基,在异养条件下,通过细胞脱分化、分裂、再分化来实现全能性。 生命周期、细胞周期和组织培养周期三者之间联系密切,自Swift(1950)发现DNA复制发生在细胞间期而不是有丝分裂期时起,生命周期和细胞周期的联系已为人所共知。生命周期是通过细胞周期来实现全能性。之后由于DNA重组技术的成功,密切了细胞周期与组织培养周期之间的联系。克隆后的DNA,必须通过组织培养周期实现转化和表达;组织培养周期又必须通过生命周期来实现细胞的全能性。可见,通过生命周期、细胞周期和组织培养周期可使植物细胞全能性得以充分实现和利用。同时证明离体培养技术,在实现植物细胞全能性中的重要作用。离体培养技术的作用在于将离体状态下的植物细胞,通过理化因子的人工调控而发育成完整植物体。从而使植物固有的潜在能力得以充分表达。 离体培养条件下的植物细胞全能性 的实现结果 (1)以植物的体细胞(如根、茎、叶、花、果、木质部、形成层、韧皮部、中柱鞘等)为培养材料,可以诱导形成完整植物体。该植物体为两套染色体组,可正常开花结实。 (2)以植物的性细胞(如小孢于和大孢子细胞)为培养材料,可以诱导形成完整植物体。该植物体为单套染色体组,不能正常开花结实。 (3)用酶法除去植物细胞的细胞壁,培养裸露的原生质体,可使原生质体发育成为植物体。 (4)加入某种诱导剂,可以促使两个不同种的原生质体相互融合,继续培养融合后的原生质体使之发育成为杂种植物体。 (5)将遗传信息(基因),通过不同基因载体(Ti或Ri质粒)引入植物细胞, 使植物细胞在分子水平上发生修饰。经过离体培养后,使之再生成具有新性状的植物体。 (1)动物、植物在营养需要上的不同 ① 植物是自养的,植物细胞内有

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