20150202纤维素测定.docx

食品中不溶性膳食纤维测定1. 范围：适用于各类植物性食品和含有植物性食品的混合食品中不溶性膳食纤维：其方法检出限为0.1mg。2. 原理：在中性洗涤剂的消化作用下，试样中的糖、淀粉、蛋白质、果胶等物质被溶解除去，不能消化的残渣为不溶性膳食纤维，主要包括纤维素、半纤维素、木质素、角质和二氧化硅等，还包括不溶性灰分。3. 试剂（1）无水硫酸钠；（2）石油醚：沸程30℃~60℃；（3）丙酮；（4）甲苯；（5）中性洗涤剂溶液：将18.61gEDTA二钠盐和6.81g四硼酸钠（含10H2O）置于烧杯中，加水约150ml，加热使之溶解，将30g月桂基硫酸钠（化学纯）和10ml乙二醇独乙醚（化学纯）溶于约700ml热水中，合并上述两种溶液，再将4.56g无水磷酸氢二钠溶于150ml热水中，再并入上述溶液中，用磷酸调节上述混合液至pH6.9~7.1，最后加水至1000ml；（6）磷酸磷酸盐缓冲液：由38.7ml 0.1mol/L磷酸氢二钠混合而成，pH为7.0；（7）2.5% α-淀粉酶溶液：称取2.5g α-淀粉酶（美国Sigma公司，VI-A型，产品号6880）溶于100mlpH值7.0的磷酸盐缓冲液中，离心、过滤，滤过的酶液备用；（8）耐热玻璃棉（耐热130℃，美国Corning玻璃厂出品，要耐热并不易折断的玻璃棉）。4. 仪器（1）实验室常用设备；（2）烘箱：110℃~130℃；（3）恒温箱：37℃±2℃；（4）纤维测定仪；（5）没有纤维测定仪，可由下列部件组成：电热板：带控温装置；高型无嘴烧杯：600ml；坩埚式耐热玻璃滤器：容量60ml，孔径40μm~6μm；回流冷凝装置；抽滤装置：由抽滤瓶、抽滤垫及水泵组成。5. 分析步骤（1）试样处理粮食：试样用水洗3次，置60℃烘箱中烘去表面水分，磨粉，过20目~30目筛（1mm），储于塑料瓶内，放一小包樟脑精，盖紧瓶塞保存，备用。蔬菜及其他植物性食品：取其可食部，用水冲洗3次后，用纱布吸去水滴，切碎，取混合均匀的样品于60℃ 烘干，称量并计算水分含量，磨粉，过20目~30目筛，备用。或鲜试样用纱布吸去水滴，打碎、混合均匀后备用。（2）测定准确称取试样0.5~1.00g，置高型无嘴烧杯中，如试样脂肪含量超过10%，需先去除脂肪，例如1.00g试样，用石油醚（30~60℃）提取3次，每次10ml；加100ml中性洗涤剂溶液，再加0.5g无水亚硫酸钠；电炉加热，5~10min内使其煮沸，移至电热板上，保持微沸1h；于耐热玻璃滤器中，铺1~3g玻璃棉，移至烘箱内，110℃烘4h，取出置干燥器中冷却至室温，称量，得m1（准确至小数点后4位）；将煮沸后试样趁热倒入滤器，用水泵抽滤。用500ml热水（90~100℃），分数次洗烧杯及滤器，抽滤至干，洗净滤器下部的液体和泡沫，塞上棉皮塞；于滤器中加酶液体，液面需覆盖纤维，用细针挤压掉其中气泡，加数滴甲苯，上盖表玻皿，37℃恒温箱中过夜；取出滤器，除去底部塞子，抽滤去酶液，并用300ml热水分数次洗去残留酶液，用碘液检查是否有淀粉残留，如有残留，继续加酶水解，如淀粉已除尽，抽干，再以丙酮洗2次；将滤器置烘箱中，110℃烘4h，取出，置干燥器中，冷至室温，称重，得m2（准确至小数点后4位）。6. 结果计算X=（m2-m1）/m×100%式中：X为试样中不溶性膳食纤维的含量，%；m1为滤器加玻璃棉的质量，g；m2为滤器加玻璃棉及试样中纤维的质量，g；m为试样的质量，g。注：计算结果表示到小数点后两位。膳食纤维的测定方法酶-重量法1.原理：样品分别用α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化以去除蛋白质和可消化的淀粉。总膳食纤维（TDF）是先酶解，然后用乙醇沉淀，再将沉淀物过滤，将TDF残渣用乙醇和丙酮冲洗，干燥称重。不溶性和可溶性膳食纤维（IDF和SDF）是酶解后将IDF过滤，过滤后的残渣用热水冲洗，经干燥后称重。SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后再过滤，干燥，称重。 TDF、IDF和SDF量通过蛋白质、灰分含量进行校正。2.适用范围：AOAC991.43 本方法适用于各类植物性食物和保健食品。3.仪器：3.1烧杯：400或600ml高脚型。3.2 过滤用坩埚：玻料滤板，美国试验和材料学会（ASTM）40-60μm，Pyrex 60ml（Corning No.36060 buchner，或同等的）。如下处理：（1） 在灰化炉525℃灰化过夜。炉温降至130℃以下取出坩埚；（2） 用真空装置移出硅藻土和灰质；（3） 室温下用2%清洗溶液浸泡1小时；（4） 用水和去离子水冲洗坩埚；然后用15ml丙酮冲洗然后风干；（5） 在干燥的坩埚中加0.5g硅藻土，在130℃烘干恒重；（6） 在干燥器中冷却1小时，记录坩埚加硅藻土重量，精确至0.1mg。3.3 真