S-受体激酶信号传导元件THL2和MOD编码基因的克隆测序及生物信息学初探研究.docVIP

西南农业大学 硕士学位论文 S-受体激酶信号传导元件THL2和MOD编码基因的克隆 信息学初探 姓名：王茂广 申请学位级别：硕士 专业：生物化学与分子生物学 指导教师：朱利泉              ?，在?旱任换?蛐∮?? ?。虽然兜芹 ?．?Ｖ形? ?? ??蛃?相互作用的鉴定 ? ??自交不亲和反应相关基因 合．可能在?的信号转导途径中与其它分子相互作用。研究发现，??的?荒┒税??个  西南农业大学硕士学位论文 ??っ赣蛳嗷プ饔茫?庵窒嗷プ饔貌灰览盗姿峄?绞剑??切枰R桓鎏匾霻???騎??上 明这种相互作用有氧化还原作用参与。另外研究发现．??系腃?“的取代或缺失也不能和 够抑制??牧姿峄?饔茫?筍?失去活性，起一种负调控作用。当自花花粉落到柱头上时， 花粉胞被蛋自??谙赴?谥蠸?的协助下与???庥蛳嗷プ饔茫?せ钅ど系腟麟，于是 芸薹属植物的?反应的部位位于其干性柱头的表面，因此水是花粉萌发所必需的。在研 究与?有关的基因时．找到了一种编码类似水离子通道蛋白??????幕?騇?， 调节花粉与柱头之间的水分或某些小分子的运输来调控?反应??? ??牧姿峄????蚐?相互作用拒绝自体花粉的过程是怎样的?????等人???提 出了一种?反应的模式：  芸薹属植物的自交不亲和反应发生在柱头乳突中，当一个花粉粒藩在柱头乳突细胞表面 时，含有??和花粉?浠?籗?／??的花粉粒外被蛋白在花粉和柱头之间形成接触层。在 性．从而导致了??的磷酸化，这被认为是乳突细胞内信号传导的第一步。然后信号在乳突 细胞内发生级联生化反应，引起信号的传递和放大．调节相关基因的表达。并且以有初步的 ? 下一步研究的重点应该集中在?反应的下游蛋白质磷酸化方面，彻底弄清参与?反应 ?以及类硫氧还蛋白???????????? ???????? ?和??．它们属于硫              西南农业大学硕士学位论文 植物细胞具有细胞壁，而且往往还有色素、酚类化合物的存在．所以从植物材料中提取 淀??保?诠鄄斓桨咨ǖ南赶怂考跋宋?攀保??佑醚狼┙??械腄?都轻轻绕在牙签上取 出并洗涤，这样得到的??扔美胄某恋矸ㄈ〉玫腄?相比，前者的纯度更高些．整个提取 过程快且简单，提取的甘蓝和油菜基因组???．?サ那碇?悄?旱缬尽＜??，从图中可以 看出所提取的基因组??浅Ｍ暾??慷雀撸??旧厦挥械鞍字屎蚏?的污染，能够满足后 续实验要求。 ??? ??????? ?簁??疎?????????? ?篏??? ??? 心管和??用??水处理，然后高压灭菌；所用试剂为新的未用过的试剂：操作过程始终  固?萑「世逗陀娃坏纳醯馸璩膳■凝胶电津 ?????????；?焊世蹲躌?築?筒套苤較 ??且础?鸏 ? ?篫??疎?????? ?甌??基因的克隆与序列分析 ??．??基因的克隆 ??腜?扩增与克隆 ?? 青霉素的?平板上进行蓝白筛选?? ?。  ?焊世叮?R? ?? ???畂????產 ?畂??????籆：?? ? ? ： ? ? ??? ??／???????；?篢??瓺? ??? ?焊世禩?? ??克隆?焊世禡? ??? ??????????? ? 篊 ? ? ? ?篊??? ?％? ???且?????甃 ?篊??? ? ??蠥 ?显?????甃 在蓝白筛选的平板上随机挑取几个自斑．用?液体培养基扩大培养．取菌液??肞? 阳性克隆．对阳性克隆利用载体上的通用测序引物进行正反双向测序，测序由上海生工生物工 程服务有限公司完成，测序结果见附录?透铰?。  Ⅱ ： ? ? ? ??／占??????：?貉粜远哉眨築．??．?瓼：?だ?萟重组体苗液???铮籊：阴性对照 ??????? ??? ??的???扩增与克隆 ??? 含有内含子。???产物经回收纯化后克隆?? ?．选择阳性克隆寄往上海生物工程服 ???产钧 ?嚎瞻锥哉眨築：??禩?? ??? ?号鳳?? ?：????瓺????????：?築??  ??? ?且胧邺?築：??? ?直?庞蔐． ?篋：??? ?五?痚??? 一??珹?—??珹?—??，．其中??籢?是第三位密码子发生变异，未造成氨基酸的变化， ? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?  ?????? ???????????????????? ? ? ? ? ???????????????????????????????????????? ?