缺血性脑血管病患者血清淀粉样蛋白-A基因多态性的研究.docVIP

青岛大学 硕士学位论文 缺血性脑血管病患者血清淀粉样蛋白--A基因多态性的研究 姓名：战晶晶 申请学位级别：硕士 专业：神经病学 指导教师：张晨  研究背景及目的 ????。缺血性脑血管病组血清???接隒?及???水平具有明显正相关性 ??魑6鲋嘌?不?难仔员曛疚铮?斡肴毖P阅匝9懿〉姆⑸?胺⒄梗?玈? 性脑血管病的关系尚待证实。 硕士研究生战晶晶?窬?⊙?  ? ? ? ? ? ? ? ? ????? ??????? ???．? ??????? ?? ?????? ? ?? ? ???????? ? ??? ????? ? ??????? ? ?? ??????? ??? ?????? ????????? ??? ??? ?????????????????? ?? ???? ??? ??? ?? ?? ? ??????．???? ?????簂????? ? ???—????? ?? ?? ????? ?????． ? ??? ???? ???? ?????? ????????，???，????． ?? ? ??? ?? ?? ?? ?? ??????????????????琒? ? ???? ????琤? ?????????? ??? ? ????甀?? ? ??????  ???痟? ????． ? ??．?? ???????：???? ????：?????  缺血性脑血管病具有发病率、致残率、死亡率三高的特点，严重危害人类健康。 研究表明，动脉粥样硬化是缺血性脑血管病发病的重要危险因素Ⅲ，动脉粥样硬化 ? 确此基因多态性与缺血性脑血管病的相关性。  青岛大学硕士学位论文 者的血清?????水平。缺血性脑血管病组及健康对照组均来自中国北方汉族人 ??仪器及试剂 ???主要仪器 标准品?掣??曜计废∈鸵? ??? 美国雅培公司 振荡器 ? ????珿???  格兰仕，顺德市格兰仕电器实业有限公司 ??妗??普通冰箱 ??妗??℃超低温冰箱 紫外线凝胶成像分析仪 高压消毒柜 ? ????? ?．? ???提取 ?????荆?拦????? 莱阳经济技术开发区化工厂 上海振兴化工一厂 ??? 西班牙 ?????????公司，德国 ???测序  青岛大学硕士学位论文 世界卫生组织制定，同年得到中华医学会糖尿病协会认同的诊断标准。 少量血清与红细胞?种糜诹轿⒘坷胄墓苤校???嫔畹臀露炒妫?G辶舸?鯯?及 ???难G逅?郊觳猓?啄げ懔舸?崛??做多态性分析。 步骤如下： ??∥蘧?．??±胄墓芤恢唬?尤???细胞裂解液。 ??沟谆煸妊Q笕???至上述加有细胞裂解液的离心管中，颠倒离心管??次 混匀。 ??】赡芷?簧锨逡海?Ａ舭咨ǔ恋怼?．??胄墓芾锸Ｓ嘣糽???液体。 细胞。 分钟，继而冷却至室温。 ??蚝肆呀馕镏屑尤氲鞍壮恋硪簂??，用涡旋振荡器剧烈振荡?一?秒。 ?????????? ??椅吕胄?分钟，见深棕色蛋白沉淀。 ?．于?，?????? 沉淀和管壁，于?，?????? ??椅吕胄?分钟。 ?．．使用测序加样枪头小心吸走乙醇溶液，将离心管倒置在干净的吸水纸上，自然 ?∈比芙釪?。期间轻弹管壁混匀溶液。  ?．???４鍰?。 ??鞍窟抟?血清水平检测 试剂准备： 水浴锅或温箱内溶解。 ?  青岛大学硕士学位论文 为保证实验结果的准确性，稀释后的溶液不再冷冻保存。 试管中试验用，剩余底物丢弃。 实验步骤： 实验开始前，各试剂及标本均平衡至室温?????。标准品按说明稀释，标 标准品或待测样品???? ?，加样时吸头或巴氏管应接近酶标板孔底部，尽 ? 量不触及孔壁以免产生气泡，加样应迅速，加完后轻晃混匀，酶标板覆膜，于?℃ ? ???タ啄谝禾澹?檬炙Ω桑?窗寤?吹樱?靠子????吹右海?窗?次， ?看挝癖厥瓜吹右涸诳啄诮?????，最后一次洗涤后，将孔内洗涤液完全甩 ? ???タ啄谝禾澹?Ω桑?窗?次，要求同上。 ? ????，?怀?????４?曜伎椎那??孔有明显的蓝色梯度，后??孔梯 度不明显时终止反应。  第一章资料和方法 计算： 删??样品不进行稀释，其余步骤同?甅。 ?设计??璉物，引物由上海生工生物技术有限公司合成。 下游引物：?????????????’ 设计引物应遵循以下原则：  青岛大学硕士学位论文 性扩增条带。 ???基因??徊嘁砬???疌 总体系?? ???基因??徊嘁砬???疌 变性?℃ 退火?℃ 延伸?℃ 延伸?℃ ????／??蛐头中蚉?反应产物的电泳结果 图??：??????疌位点电泳图 ??????琁??2煌??镜腜?产物扩增出的特异性  第一章资料和方法 ????