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链霉素的生产 第二组： 张婉月 徐洁 臧赢 严梦迎 陈笑颜 灰色链霉菌的扩大培养与保藏 种子扩大培养:简称种子扩培.是发酵工程的一个组成部分，其实指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。 种子扩培所得的纯种培养物称为种子。 种子扩培的一般过程：斜面菌种 → 一级种子培养（摇瓶） → 二级种子培养(种子罐) → 发酵 种子应具备要求 总量及浓度能满足要求。 生理状况稳定，个体与群体区隔明显。 活力强，移种发酵后，能够迅速生长。 无杂菌污染。 种子扩培的目的 接种量的需要。 菌种的训化。 缩短发酵时间，保证生产水平。 种子的制备工艺 实验室种子制备阶段： 琼脂斜面 固体培养基扩大培养 摇瓶液体培养 生产种子制备阶段： 种子罐扩大培养 斜面孢子培养：将砂土管(或冷冻管)菌种接种到斜面培养基上，经培养后即得原始斜面。 斜面培养基： 可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，氯化钠0.5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，硫酸亚镁0.01g，琼脂20g，水1000毫升，PH7.2-7.4（配置时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中） 配制：按配方称量药品，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至1000ml。趁热分装于18ml*180ml试管，斜面以8ml为宜。分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。 高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20min，灭菌后趁热摆斜面。 摇瓶液体培养 摇瓶种子培养基：豆饼粉20g、淀粉40g、酵母膏5g、蛋白胨5g，硫酸铵3g，硫酸镁0.25g，磷酸二氢钾0.2g，碳酸钙4g，自来水1000ml、PH7.2-7.4。 配制：取干净三角烧瓶，250ml三角瓶分装培养基30-50ml，用棉塞包扎瓶口，再加牛皮纸包扎，在0.1Mpa下灭菌45-60min。 菌种的保藏 原理： 主要是根据菌种的生理生化特点，人工制造条件，是孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少变异。 一般可以通过保持培养基营养成分在最低水平，缺氧状态，干燥或低温，使种子处于“休眠”状态，抑制繁殖能力。 保藏方法 1.斜面冰箱保藏方法 4摄氏度 3—6个月 2.沙土管保藏法产 孢子或芽孢微生物 1年 3.菌丝速冻法 甘油作保护剂，零下20摄氏度 4.石蜡油封存法 1年左右 5.真空冷冻干燥保藏法 任何微生物；一般五年以上 6.液氮超低温保藏法 零下196摄氏度；保护剂；保存期长 链霉素的发酵与过程监控 链霉素的发酵与过程监控 链霉素的分离与效价测定 链霉素的提取工艺 效价： * * * 生物制药1311 链霉素的生产 灰色链霉菌的扩大培养与保藏 链霉素的发酵与过程监控 链霉素的分离与效价测定 斜面孢子培养 将砂土管（或冷冻管）保持的链霉菌孢子接种到斜面培养基，于27℃下培养7天。 摇瓶种子培养 待斜面长满孢子后，制成悬浮液接入装有培养基的摇瓶中，于27℃下培养45-48小时，待菌丝生长旺盛。 种子罐扩大培养 取若干个摇瓶，合并其中的培养液将其接种10%于种子罐内已灭菌的培养基，通入无菌空气搅拌，在罐温27℃下培养62-63小时，然后接入发酵罐内已灭菌的培养基中，通入无菌空气，搅拌培养，在罐温27℃下，发酵约7-8天。 * * * *
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