M蛋白的检测与鉴定M蛋白的检测与鉴定.doc

M蛋白的检测与鉴定 　 一、M蛋白的基础知识 M蛋白是浆细胞或B 淋巴细胞单克隆大量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白，其氨基酸组成及排列顺序十分均一，空间构象、电泳特征也完全相同，本质为免疫球蛋白或其片段（轻链、重链等）。由于它产生于单一克隆（monoclone），又常出现于多发性骨髓瘤（multiple myeloma）、巨球蛋白血症（macroglobulinemia）、恶性淋巴瘤（malignantlym phoma） 病人的血或尿中，故称M 蛋白。这些M 蛋白大多无抗体活性，所以又称为副蛋白（paraprotein）。 M 蛋白血症可分为恶性与意义不明的两大类。恶性M 蛋白血症多见于多发性骨髓瘤（包括轻链病）、巨球蛋白血症、重链病、7SIg M 病（Solomen －Konkel 病）、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病（C 端基因缺陷） 等。意义不明的M 蛋白血症（monoclonal gammopathyof undetermined significance ，M G US） 又分为两种，一种是与其他恶性肿瘤（如恶性淋巴瘤） 伴发者，另一种即所谓良性M 蛋白血症。 M 蛋白的检测方法主要有琼脂或琼脂糖电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、选择免疫电泳等。 二、M蛋白的鉴定 1．多发性骨髓瘤与巨球蛋白血症时的M 蛋白检测和鉴定 （1）血清总蛋白定量。90％ 的患者血清总蛋白含量升高（70％ 的患者＞100g／L），约10％的患者正常或甚至偏低（如轻链病时）。 （2）血清蛋白醋纤膜或琼脂糖电泳。M 蛋白在电泳时出现典型的单株峰（亦称M区带），特点是区带窄而浓，扫描时呈现尖高峰，在γ区高比宽≥2，在β区≥1。此M区带可因Ig的不同而出现在在γ～α2的任何区域。M蛋白增殖的另一特点是其他各区带明显减少，显示图像较简单。有时有的患者血中M蛋白并不高，这是由突变细胞的Ig分泌能力决定的。这种病人的血清在电泳时M峰可不明显，易被其他蛋白掩盖，需采用稀释血清成应用其他敏感方法如免疫固定电泳来检测。 （3）血清Ig定量。一般M蛋白所属Ig含量均显著增高，其他类Ig则正常或显著减低。 （4）免疫电泳。 ① 正常人血清免疫电泳结果：可分辨出20 多种蛋白成分。在阳极端有船形很浓的沉淀线为白蛋白。通常Ig组分靠阴极端，最靠近加样孔者为Ig M，依次为IgA、IgG，三者成平滑的连续沉淀线。 ② 多发骨髓瘤：多发性骨髓瘤分IgG、IgA、Ig M、IgI）和IgE5 种，IgG 和IgA 又分亚类，所有Ig的轻链又分两个型。因此，免疫电泳时变形沉淀线的位置随各分子的电泳区带不同而异，从慢γ～β2区皆可出现。IgG 1 多出现在慢γ区，IgG 4 在β～α2区。M 蛋白与相应的抗重链血清、抗轻链血清形成迁移范围十分局限的浓密的沉淀弧。由于此种病人血清中Ig 含量甚高，免疫扩散时可出现抗原绝对过剩而不出现沉淀线，此时需稀释血清重做，往往可获得满意结果。③ 巨球蛋白血症：由于IgM 分子大量增殖所致。在免疫电泳时，常常出现以下特征：一是沉淀线明显变形。正常情况下，IgM形成短小沉淀线，不易看到变形。当IgM大量出现时，则会使整个IgM沉淀线变形。二是抗原孔周围和电泳纵轴出现团块状沉淀。三是电泳时IgM组分无迁移，这多是Ig M分子聚合，电泳不移动所致。 （5）尿本－周蛋白检测。 ① 定性检测： 用热沉淀法和磺基水杨酸法。 ② 免疫电泳法：用待检尿浓缩后进行免疫电泳，大多数多发性骨髓瘤病人和轻链病患者，仅出现一条致密的弓形弯曲的沉淀线。本法60％～80％的骨髓瘤病人和几乎全部轻链病病人可检出尿本周蛋白。 ③ 轻链白蛋白－戊二醛交联免疫电泳法：多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症及轻链病可呈阳性，正常人阴性。本法尿本周蛋白检出率为100％，假阳性4％，尿中含有200μg／ml 时即可出现阳性结果。 2．重链病时M 蛋白检测与鉴定 与多发性骨髓瘤相同，免疫电泳时由于重链分子较Ig 分子小，故迁移率快，电泳位置较靠阳极侧（β～α）。但重链病一般需选择免疫电泳证实。 3．7SIg M 病时M 蛋白的检测与鉴定 一般Ig M 为五聚体，沉降系数为19S ，而7S IgM患者的IgM为单体，沉降系数为7S 。证明7S IgM 有两种方法：一种是在测定Ig M 总量后，将被测血清1～2 ml 过Sepharose 6B柱，再根据洗脱峰图用面积仪测出7S Ig M占总IgM的百分比，与Ig M总量换算即得7S IgM的绝对值。另一方法即为植物血凝素（PHA）选择电泳。此法原理是五聚体Ig M可与PHA 结合形成沉淀，而单体IgM不与PHA结合。在琼脂胶中加入PHA，后进行电泳，五聚体IgM 被P H A 所阻留，而7S Ig M 继续向阳极泳动，并可与随后加至抗体槽中的Ig M 抗