《平邑甜茶论文：平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表达分析.doc

平邑甜茶论文：平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表达分析 【中文摘要】转录因子是结合在基因特定DNA序列上的蛋白质,它通过增强或抑制基因的转录效率来调控基因的表达水平,真核生物的基因表达调控主要是在转录水平进行。WRKY转录因子作为一种重要的诱导型调节因子,参与植物的多种防卫反应、生长发育调节以及物质代谢调节等各种重要生理活动。平邑甜茶(Malus hupehensis (Pamp) Rehd. var pinyiensis Jiang)是我国特有的植物资源,常用作苹果和观赏海棠的砧木。本研究以平邑甜茶为试材,克隆了MhWRKY15基因的全长cDNA序列,并运用生物信息学手段分析了其基因序列与编码蛋白的性质和功能;同时,研究了其在生长过程及逆境胁迫下的表达情况,并成功构建RNAi载体并转化拟南芥,获得转基因拟南芥植株。主要结果如下:1).获得了平邑甜茶MhWRKY15基因,该基因cDNA全长1091bp,含有810bp的完整开放阅读框,编码269个氨基酸,属于WRKY类转录因子的第II组,为WRKY15家族成员。GenBank登录号为GU576874。2).生物信息学分析表明, MhWRKY15编码蛋白为可溶性蛋白,其分子式为C_(1263)H_(1... 【英文摘要】Transcription factors were proteins that binding with specific DNA sequences of target gene, which could regulate gene expression by enhancing or inhibiting the efficiency of gene transcription. Regulation of the gene expression in eukaryotic was mainly at the transcriptional level. WRKY transcription factor was an important inducible regulatory factor which participated in a variety of important physiological activities, such as plant defense responses, growth regulation and metabolism regulation.Malus... 【关键词】平邑甜茶 WRKY15基因分离 RNAi 拟南芥转化 半定量RT-PCR 【英文关键词】Malus hupehensis (Pamp) Rehd. WRKY15 gene isolation RNAi Transformation of Arabidopsis thaliana semi RT-PCR 【目录】平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表达分析 英文缩写符号及其中英文对照表 4-9 中文摘要 9-10 Abstract 10-11 1　前言 12-23 1.1 WRKY 的结构特征及其分类 12-13 1.2 WRKY 转录因子的结构域 13-14 1.3 WRKY 转录因子的表达及其生物学功能 14-20 1.3.1 WRKY 转录因子的表达特性 14-15 1.3.2 WRKY 转录因子在植物防卫反应中的作用 15-17 1.3.3 WRKY 转录因子在植物形态建成中的作用 17 1.3.4 WRKY 转录因子在植物代谢中的作用 17-18 1.3.5 WRKY 与MAPK 相互作用关系 18-20 1.4 果树转录因子研究进展 20-22 1.5 本研究目的和意义 22-23 2 材料与方法 23-37 2.1 试验材料 23-24 2.1.1 试材 23 2.1.2 菌株与质粒 23 2.1.3 酶及生化试剂 23 2.1.4 PCR 引物 23-24 2.2 试验方法 24-37 2.2.1 平邑甜茶总RNA 的提取 24-25 2.2.2 RT-PCR 反转录合成cDNA 25-26 2.2.3 MhWRKY15 全长序列的扩增 26-31 2.2.3.1 巢式PCR 扩增MhWRKY15 中间片段 26-27 2.2.3.2 3’-RACE 扩增3’端序列 27 2.2.3.3 5’-RACE 获得5’端序列 27-31 2.2.4 DNA 片段与克隆载体的连接 31 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 31-32 2.2.5.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 31 2.2.5.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 31-32 2.2.6 碱法小量质粒DNA 的提取 32 2.2.7 凝胶电泳中DNA 片段的回收 32-3