实验5 蔗糖酶分离纯化产物的SDS-PAGE检测分析及蛋白质相对分子质量测定.ppt

* * 蔗糖酶分离纯化产物的SDS－PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定 实验五 丁鸣 一、实验目的和要求 1、学习SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法 2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS－PAGE检测分析 3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法 二、实验基本原理 1、电泳 是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。 2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品，主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。 3、区带电泳：是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区带电泳。 4、聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel,简称PAG) 是由丙烯酰胺（Acr)和交联试剂N,N’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在有引发剂（如过硫酸铵或核黄素）和增速剂（如N,N,N’,N’-四甲基乙二胺，TEMED）的情况下聚合而成的。 丙烯酰胺 N,N’-甲叉双丙烯酰胺 聚丙烯酰胺凝胶三维结构 5、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 是在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，这主要是由蛋白质样品所带的电荷和分子质量的差异性进行分离；在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象、亚基之间的相互作用及其生物活性。 6、聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为： ⑴连续系统 凝胶缓