第四部分 生物化学和分子生物学技术实践.pptVIP

按配方准备好各组分→ →离心使反应液 集中在离心管底部→设计好PCR仪的循环程序→进 行PCR反应。 请写出图中方框的步骤： ， 该步操作应特别注意的问题是 。 GCAATCGTGC GGCTTATCGA ACTGACGGTT 遗体中的DNA碱基序列 CGGTAAGACG CCGAATAGCA TGACTGCCAA 家属提供的DNA碱基序列 C组 B组 A组 （2）上表所示为分别从死者遗体和死者生前的生 活用品中提取的三条相同染色体上的同一区段DNA 单链的碱基序列，根据碱基互补配对情况进行判 断，A、B、C三组DNA中不是同一人的是 。 （3）为什么从死者体细胞与死者家属提供的其生 前生活用品中分别提取的DNA可以完全互补配对？ 。 解析 PCR技术是一种体外迅速扩增DNA片段的技 术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制 出上百万份的DNA拷贝。这项技术有效地解决了因 为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究 的问题，被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破 案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定等领域。 DNA杂交技术方法是从遗体细胞和死者家属提供的 死者生前的生活用品中分别提取DNA，在一定温度 下，水浴共热，使DNA氢键断裂，双链打开。若两 份DNA样本来自同一个体，在温度降低时，两份样 本中的DNA单链通过氢键连接在一起，若不是来自 同一个体，则两份样本中的DNA单链在一定程度上 不能互补，DNA杂交技术就是通过这一过程对面目 全非的死者进行辨认的。 答案 （1）用微量移液器在微量离心管中依次加 入各组分PCR实验使用的微量离心管、枪头、缓冲 液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌 （2）B、C （3）人体所有体细胞均由一个受精卵 有丝分裂产生，其细胞核中均含有相同的遗传物质 2.对血红蛋白（Hb）的研究结果表明，血红蛋白实际 上是由珠蛋白、原卟琳和二价铁离子（Fe2+）所组 成的结合蛋白质，由4条肽链各结合一个辅基即血 红素，O2结合于Fe2+上，血红蛋白与氧疏松结合形 成氧合血红蛋白（HbO2），这种氧合作用在氧分压 高时容易进行，在氧分压低时易于解离。红细胞结 合和携带O2的过程并不影响Fe2+，也就是说不会使 之氧化为Fe3+。Fe3+无携带O2的能力。CO与Hb的亲和 力大于O2，结合成HbCO后不能分离，致使Hb丧失运 输O2和CO2的机能，这称为一氧化碳中毒即煤气 中毒。 （1）用凝胶色谱法分离血红蛋白时，待 接近色谱柱底端时，才用试管收集。血红蛋白因含 而呈现红色。 （2）要使血红蛋白从红细胞中释放出来，可选用 的方法是 。 （3）红细胞具有运输氧的功能，是因为 。 （4）亚硝酸盐为强氧化剂，进入人体后，可使血 红蛋白失去运输氧的功能，导致人体组织缺氧，其 可能的原因是 。 解析 用凝胶色谱法分离血红蛋白时，血红蛋白因 含血红素而呈现红色，待红色区带接近色谱柱底端 时，才用试管收集。将红细胞置于蒸馏水中，加 40%体积的甲苯，搅拌使红细胞破裂并释放出血红 蛋白。红细胞中的血红蛋白与氧在氧分压高时容易 结合，在氧分压低时又容易分离。亚硝酸盐可将血 细胞中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，从而使 其失去与氧结合的能力。 答案 （1）红色区带 血红素 （2）将红细胞置 于蒸馏水中，加40%体积的甲苯，搅拌使之破裂并 释放血红蛋白 （3）红细胞中的血红蛋白与氧在氧分压高时容易 结合，在氧分压低时又容易分离 （4）亚硝酸盐 可使血细胞中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白 3.PCR（聚合酶链式反应）技术是一项在生物体外 复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示 合成过程，请据图分析回答： （1）A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理 叙述，正确的是 。 A.该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键 B.该过程用到限制性核酸内切酶破坏磷酸二酯键 C.该过程不需要解旋酶的作用 D.该过程与人体细胞的过程完全相同 （2）C过程要用到的酶是 。这种酶在高温下 仍保持活性，因此在PCR扩增时可以 加入， （需要/不需要）再添加。PCR反应除提供 酶外