第16章RNA的生物合成材料.ppt

四.原核细胞的转录后加工 1.mRNA：很少进行加工和修饰 2.rRNA: 1)剪切：特定的RNA酶催化，将初级产物剪成16S，23S和5S三个片段 2)修饰：最常见的是2’羟基甲基化 3.tRNA：①由核酸内切酶在tRNA两端切断②由核酸外切酶从3’端逐个切去附加顺序,进行修饰③在3’端加上CCA-OH结构④核苷酸的修饰和异构化 真核生物RNA的加工和降解 The Processing and Degradation of Eukaryotic RNA 第四节 真核生物转录生成的RNA分子是初级RNA转录物(primary RNA transcript)，几乎所有的初级RNA转录物都要经过加工，才能成为具有功能的成熟的RNA。 加工主要在细胞核中进行。 几种主要的修饰方式 1. 剪接(splicing) 2. 剪切(cleavage) 3. 修饰(modification) 4. 添加(addition) 5. RNA编辑(RNA editing) 一、真核生物mRNA的转录后加工 （一）首、尾的修饰 5?端形成 帽子结构(m7GpppGp —) 5? pppGp… 5? GpppGp… pppG ppi 鸟苷酸转移酶 5? m7GpppGp… 甲基转移酶 SAM 帽子结构的生成 5? pGp… 磷酸酶 PPi 5’－5’相对连接，又称面对面核苷酸结构 (Confronted nucleotide structure) 帽子 帽子结构(7-甲基鸟嘌呤三磷酸鸟苷) 帽结构的意义： 可以使mRNA免遭核酸酶的攻击； 也能与帽结合蛋白质复合体(cap-binding complex of protein)结合，并参与mRNA和核糖体的结合，启动蛋白质的生物合成。 长度：100－200个AMP。 PolyA 的长短与维持mRNA 作为翻译模板的活性，以及mRNA本身稳定性的因素有关。 （二） 3?端加上多聚腺苷酸尾巴(poly A tail) 前体mRNA在3?-端特异位点断裂并加上多聚腺苷酸尾 尾部修饰是和转录终止同时进行的过程。 poly A的有无与长短，是维持mRNA作为翻译模板的活性，以及增加mRNA本身稳定性的因素。 一般真核生物在胞浆内出现的mRNA，其poly A长度为100至200个核苷酸之间，也有少数例外。 前体mRNA分子的断裂和加多聚腺苷酸尾是多步骤过程。 1.对大多数基因进行研究,发现都没有相应的3’端多聚T序列,说明poly A 的出现并不依赖于模板; 2.加入poly A 前,先要由核酸外切酶切除3’端一些过剩的核苷酸,然后再加入poly A 3.在hnRNA上也发现poly A ，推测这一过程也在核内完成，并且先于mRNA的剪接 （三）mRNA的剪接 1. hnRNA 和 snRNA 核内的初级mRNA称为杂化核RNA (hetero-nuclear RNA, hnRNA) snRNA (small nuclear RNA) 核内的蛋白质 小分子核糖核蛋白体 （拼接体, snRNP） snRNA 真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。 断裂基因(splite gene) C A B D 编码区 A、B、C、D 非编码区 2. 外显子(exon)和内含子(intron) 外显子 在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的核酸序列。 内含子 隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列。 （一）转录起始 转录起始需解决两个问题： RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。 DNA双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。 位于基因上游，与RNA聚合酶识别、结合并起始转录有关的一些DNA调控序列被称为启动子（promoter）。 启动子序列通常由一些带共性的保守序列构成。 调控序列中的启动子是RNA聚合酶结合模板DNA的部位，也是控制转录的关键部位。原核生物以RNA聚合酶全酶结合到DNA的启动子上而起动转录，其中由σ亚基辨认启动子，其他亚基相互配合。 对启动子的研究，常采用一种巧妙的方法即RNA聚合酶保护法。 RNA聚合酶保护法 目 录 开始转录 (Pribnow box) T A T A A T Pu A T A T T A Py -10 区 1 -30 -50 10 -10 -40 -20 5 ? 3 ? 3 ? 5 ? 原核生物启动子的保守序列 T T G A C A A A C T G T -35 区 RNA-pol辨认位点 (recognition site) 5? 5? RNA聚合酶结合区 结构基因 3? 3?