火锅底料调料中罂粟壳生物碱成分系统内部检测方法.docVIP

附件4： 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于火锅酱料、汤料、调味料等火锅食品中罂粟碱、那可丁、蒂巴因、吗啡、可待因的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 样品采用改良后的QuEChERS技术进行提取净化，用液相色谱－串联质谱仪检测，吗啡和可待因采用内标法定量，罂粟碱、蒂巴因和那可丁采用外标法定量。 4 试剂与材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 盐酸。 4.5 甲酸铵。 4.6 氢氧化钠。 4.7 无水硫酸镁：研磨后在500 ℃马弗炉内烘5 h，200 ℃时取出装瓶，贮于干燥器中，冷却后备用。 4.8 无水醋酸钠。 4.9 键合硅固相萃取吸附剂PSA（primary secondary amine，伯仲胺）：粒度40～70 μm。 4.10 键合硅固相萃取吸附剂C18：粒度46 μm。 4.11 0.1 mol/L盐酸溶液：量取盐酸（4.4）9 mL，加水至1 L ，摇匀备用。 4.12 10 mmol/L甲酸铵溶液：准确称取1.26 g甲酸铵（4.5）溶解于适量水中，定容至2 L，混匀后备用。 4.13 0.5 %甲酸的甲醇溶液：量取甲酸（4.3）1 mL，置200 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀备用。 4.14 1 mol/L氢氧化钠溶液：准确称取40 g氢氧化钠溶解于适量水中，定容至1 L，混匀后备用。 4.15 盐酸罂粟碱、吗啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因标准品：纯度不少于98％。 4.16 内标物质：吗啡-D3溶液，可待因-D3溶液。 4.17 标准储备液：精密称取盐酸罂粟碱、那可丁、蒂巴因、吗啡和磷酸可待因标准品适量，用0.5 ％甲酸的甲醇溶液（4.13）配制成罂粟碱、那可丁、蒂巴因、吗啡和可待因的浓度均为1.0 mg/mL的溶液，作为标准储备液。4℃避光保存，可使用三个月。 4.18 混合标准品溶液：精密吸取浓度为1.0 mg/mL的罂粟碱、那可丁、蒂巴因储备液各1.0 mL和浓度为1.0 mg/mL的吗啡、可待因储备溶液各5 mL于20 mL容量瓶中，用乙腈（4.2）定容至刻度，摇匀，即得含罂粟碱、那可丁、蒂巴因浓度为50 μg/mL和吗啡、磷酸可待因浓度为250 μg/mL的混合标准品溶液。临用新配。 4.19 同位素内标工作溶液（5.0 μg/mL）：分别精密吸取内标物质（4.16）适量，用甲醇（4.1）稀释成浓度为5.0 μg/mL的溶液，即得。 4.20 标准工作液的配制：分别精密吸取上述混合标准品溶液和同位素内标工作液适量，用乙腈（4.2）稀释成内标溶液浓度为50 ng/mL，吗啡、可待因浓度为5.0 ng/mL～250.0 ng/mL，罂粟碱、那可丁、蒂巴因浓度为1.0 ng/mL～50 ng/mL的系列标准工作液。临用新配。 4.21 含0.1 %甲酸的乙腈：量取甲酸（4.3）1 mL，加乙腈（4.2）稀释至1 L，摇匀，过滤。 4.22 含0.1 %甲酸的10 mmol/L甲酸铵溶液：量取甲酸（4.3）1 mL，加10 mmol/L甲酸铵溶液（4.12）稀释至1 L，摇匀，过滤。 4.23 滤膜：0.22 μm（尼龙）。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。 5.2 分析天平：感量0.000 1 g，0.01 g。 5.3 离心机：≥10 000 转/分钟。 5.4 超声波清洗器。 5.5 涡旋混合器。 6 分析步骤 6.1 提取 6.1.1 火锅酱料、汤、调味油 称取2 g试样（精确至0.01 g）于50 mL聚四氟乙烯具塞离心管中，加入150 μL同位素内标工作液（4.19），再加入5 mL水，振摇使分散均匀（酱类样品必要时可加10 mL水），加入15 mL乙腈（4.2），涡旋振荡1 min，加入6 g无水硫酸镁（4.7）和1.5 g无水醋酸钠（4.8）的混合粉末（或以相当的市售商品代替），迅速振摇，涡旋振荡1 min.，以4000 转/分钟离心5 min，取上清液待净化。 6.1.2 固体类调味粉 称取2 g试样（精确至0.01 g）于50 mL聚四氟乙烯具