第六章酶类生化产品制备技术说课.pptVIP

生化工艺学课件第六章 酶类生化产品制备技术 第六章 酶类生化产品制备技术 §6.1 概述 §6.2 酶的组成及分类 §6.3 酶的应用 §6.4 酶类生化产品的分离纯化方法 §6.5 木瓜蛋白酶的提取 §6.6 凝血酶的制备 §6.7 尿激酶的提取 §6.8 人尿激肽释放酶的提取、§6.9 糜蛋白酶的提取、§6.10 细胞色素c的提取 §6.11 超氧化物歧化酶的制备 §6.1 概述 世界酶制剂厂著名公司：丹麦Novo公司、荷兰的Gist-Brocades公司、美国的国际Genencor公司、芬兰的Alko公司、德国的Bayer AG公司、芬兰的Aultor公司、日本的天野制药和长濑产业等 欧洲在酶工程领域的研究项目主要集中于脂肪酶和磷脂酶的生产和利用、高温菌中多糖类物质的生产、酶法生产中间体、与酶生产相关的微生物基因组的研究 我国酶制剂生产企业上百家，仅占世界总份额2％左右 工业酶制剂的来源及特点 已发现数千种，工业常用酶仅有数十种，目前大量生产的仅有十余种 80％以上的工业酶为水解酶，用于降解自然界中的淀粉、蛋白质、脂肪等高聚物→淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶 大多数酶是从微生物中获得的 目前嗜极菌极端酶在酶制剂工业中迅速发展，第一个极端酶？（应用于PCR技术） 酶制剂的等级 工业级、食品级、医药级 食品级与医药级酶制剂纯度要求严格，且要进行产品毒性和安全性的评价，新型微生物在食品和医药界的应用，须得到法定机构的安全性确认→大多食品工业微生物的生产仅限于11种真菌、8种细菌、4种酵母菌 在识别与出售时，酶的指标为催化活力，而非重量→储存时生物活性与稳定性非常重要 一般而言，含杂蛋白的酶制剂比纯品稳定，干燥品比液体制剂稳定 酶制剂品种的开发 1）食品加工用酶：生产低聚糖的酶，如葡萄糖转苷酶、（低聚异麦芽糖）、β-果糖基果糖转移酶（乳果糖）以及环糊精转移酶的蛋白质修饰，以得到α、 β、γ环状糊精 2）饲料用酶：NSP酶、植酸酶等 3）纺织及洗涤剂用酶：eg.原果胶酶，既可除去对皮肤有刺痛作用的原果胶质，又可提高染色性；碱性丝氨酸型蛋白酶、碱性脂肪酶、碱性纤维素酶和淀粉酶现已扩展到洁具、厨具相关领域 4）临床诊断、治疗用酶、化妆品用酶：风险较大，但成功后效益较高 §6.2 酶的组成及分类 按酶的组成分类 按酶所催化反应的类型分类 按其功效和临床作用分类： 消化酶：胰酶、胰酯酶、胃蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、β-半乳糖苷酶等 抗炎、黏痰溶解酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、胶原酶、超氧化物歧化酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、核糖核酸酶等 抗凝或止血酶：链激、尿激酶纤溶酶等；凝血酶、促凝血酶原激酶。 §6.3 酶的应用 助消化酶类生化产品：补充内源消化酶的不足，促进食物中各类营养物质的吸收、治疗消化器管疾病及各种原因引起的食欲不振、消化不良，如胃蛋白酶、胰酶、凝乳酶、纤维素酶和麦芽糖淀粉酶等——多酶片 消炎酶类生化产品：蛋白酶作为抗炎剂；溶解黏痰作用酶 心血管疾病治疗酶类生化产品：弹性蛋白酶、激肽释放酶、溶栓酶、凝血酶 抗肿瘤酶类生化产品：L-天冬酰胺酶治疗淋巴肉瘤和白血病；谷氨酰胺酶、蛋氨酸酶、组氨酸酶、酪氨酸氧化酶 §6.4 酶类生化产品的提取分离方法 酶的提取分离包括5步：原料的选择、酶生物原料的预处理、提取、纯化或结晶 利用酶的催化活性作为选择提纯方法和操作条件的指标，在提取和纯化过程中，应随时测定总活力和比活力→了解每一步的收率和纯度→分析和决定下一步工艺的取舍 生物细胞中酶的总量不少，但每一种含量非常小，大都在0.0001%-1% 一、酶的原料选择 不同酶的用料选择：原材料来源丰富，含量较高； 不同生长发育情况及营养状况：微生物制酶时需测定酶活力来决定取酶阶段，动物器官提取酶则与动物年龄及饲养有关 动植物提取酶收到原料的限制，工业生产的重点已逐渐转向微生物（不受季节、气候和地域限制，生产周期短、产量高、成本低，能大规模生产） 二、酶的预处理、提取纯化 动物组织经丙酮迅速脱水制成丙酮粉（冷丙酮低温处理），低温储存数年；微生物大量保存时可采用干燥法（细胞自溶、增加酶释放） 一个好的方法应该：比活力提高大、总活力回收高、重复性好；不要重复同一步骤或同一方法（不但不能去掉不同种类的杂质，还会使酶总活力下降） 在逐渐纯化过程中，随着杂质的去除，蛋白质总浓度下降，相互稳定性也随之减弱，酶易于失活 三、酶的纯度与产量 酶的纯度用比活力来表示，比活力越高，酶纯度越高 每一操作步骤尽量测定三个指标：总蛋白、总活力、比活力，在提纯的过程中，上述指标的变化趋势如何？ 酶的纯度鉴定一般采用电泳法或HPLC法 纯化倍数、产量的定义 §6.5 木瓜蛋白酶的提取 木瓜蛋白酶的精制提取工艺 一、体内的凝血过程 凝血机制 §6.