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* 第3讲 植物的组织培养技术 一、植物组织培养的过程 1.菊花的组织培养过程 二、影响植物组织培养的因素及成功的关键 1.影响因素 (1)内部因素:材料的选取。 (2)外部因素:营养成分的种类及配比;植物激素的用量及使用顺序;pH、温度、光照等。 2.获得成功的关键 (1)植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗逆性差,对培养条件要求较高。 (2)培养材料一旦被微生物污染,就会导致实验失败。原因是微生物增殖快,生长迅速,消耗养分多,并产生代谢废物毒害培养材料。 (3)无菌技术主要包括对操作空间、实验用具、实验材料以及操作者的消毒灭菌。 三、实验操作中应注意的几个问题 1.材料的选取:菊花的组织培养实验中,应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝;月季花药的培养实验中,应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。 2.外植体消毒:所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液,所使用的清洗液是无菌水。 3.培养过程:在初期,菊花的组织培养需光照,月季花药的培养不需光照,而在后期均需光照。 【例1】利用植物组织培养的方法可快速、大量繁殖植物,在培养过程中,取该植物的花芽并将其分别培养在含有不同比例的生长素和细胞分裂素的培养基中,花芽的生长状况如下表所示: 生长素 细胞分裂素 花芽生长状况 A组花芽 0 0 组织切块 B组花芽 3 ppm 0.2 ppm 形成愈伤组织 C组花芽 3 ppm 0.002 ppm 愈伤组织分化出根 D组花芽 0.03 ppm 1.0 ppm 愈伤组织分化出嫩枝 E组花芽 0 0.2 ppm 稍生长 (1)在此过程中能实现脱分化的花芽是________组。从实验结果可以看出,能诱导新的花芽形成的条件是________________________________________________________________________。 (2)上述实验结果说明,在植物组织培养过程中,诱导芽和根形成的关键是培养基中_______________。 在生产实践中,欲快速、大量获得此植物的花芽,可选用______组的培养基进行扩大生产。 【解析】脱分化、再分化过程与植物激素——生长素和细胞分裂素有关,且生长素用量与细胞分裂素用量直接影响培养过程。当生长素/细胞分裂素比值高时,有利于根的分化,抑制芽的分化,即表中的C组;当生长素/细胞分裂素比值低时,有利于芽的分化,抑制根的分化,即表中的D组;当比值适中时,有利于促进愈伤组织的生长,即表中的B组。欲快速、大量获得此植物的花芽,必须首先获得大量的嫩枝。 【答案】 (1)B、C、D 细胞分裂素浓度大于生长素浓度 (2)细胞分裂素含量与生长素含量之间的比例(或培养基中细胞分裂素与生长素的浓度比) D 1.植物激素在组织培养过程中的作用 2.如果发现培养物被污染,特别是真菌性污染,一定不要打开培养瓶。应先将被污染的培养瓶统一放在高压蒸气锅内进行高压蒸汽灭菌,再打开培养瓶进行清理。区分污染类型的方法:比较菌落特征。真菌污染:有颜色的绒毛状菌落;细菌污染:有光泽的黏液状菌落。 1.(2008·江苏)下列关于植物组织培养的叙述中,错误的是( ) A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B.培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C.离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织 D.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同 D 【解析】此题考查学生对植物组织培养技术的掌握。培养基中加入蔗糖的目的:一方面可以提供营养,另一方面可以调节渗透压;在整个组织培养过程中影响再分化的关键是生长素和细胞分裂素的使用比例和使用顺序;组织培养过程中的第一个关键环节是脱分化,从而形成愈伤组织;组织培养的对象既可以是体细胞也可以是生殖细胞,因此获得的愈伤组织的基因组成不一定相同,采用绿色开花植物的生殖器官部位如花药进行培养获得的愈伤组织的基因只有体细胞的一半。 2.(2008·江苏)某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染,为查找污染原因设计了4个实验,实验条件除图示外其他均相同。下列各图表示实验结果,据图可得出的初步结论是(多选)( ) ABCD A.污染主要不是培养基灭菌时间短造成的 B.污染主要来源于组织培养所用的离体组织 C.调节培养基pH不能解决污染问题 D.调节培养温度不能解决污染问题 【解析】从图一不
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