细胞培养实验指导..doc

第五章 细胞培养实验 实验一 普通光学显微镜的结构和使用 【实验目的】 1.熟悉显微镜的结构和各部件性能。 2.掌握低倍镜、高倍镜的正确使用方法，熟悉油镜的使用方法。 【实验内容】 1.显微镜成像原理（图1—1） 标本（F1）置于聚光器与物镜之间，目镜、物镜、聚光器各自相当于一个凸透镜。平行的光线自反射镜折射入聚光器，经聚光器集聚增强，照射在标本上。标本的像经物镜放大成像于F2处，像是倒像。目镜将此例像进一步放大，并成像于人眼的视网膜上(F3)（正像）。 2.显微镜的结构 1）机械部分 （1）镜座：显微镜的基座。起稳定和支持整个镜身的作用。有的显微镜在镜座内装有照明光源等构造（图1—2）。 （2）镜臂：支持镜筒和镜台。镜筒直立式光镜在镜臂和镜柱之间有一可活动的关节叫倾斜关节，可使镜臂作适当倾斜，便于观察。镜筒倾斜式显微镜由于镜臂和镜柱连为一体，故无此关节。 （3）镜筒：位于镜臂前方的圆筒，上端安装目镜，下端装有旋转盘。根据镜筒的数目，光镜可分为单筒式和双筒式两类。 （4）载物台：在镜筒下方，方形或圆形．放玻片标本用。载物台中央有一圆形通光孔，两旁备有一压片夹。有的载物台上装有标本移动器，移动器上装有弹簧夹，用于固定标本片。移动器的一侧有两个旋钮，转动旋钮可使玻片前后左右移动。 （5）物镜转换器：圆盘状，在镜筒下方，其上装有3—4个放大倍数不同的物镜。旋转物镜转换器可更换物镜。 （6）聚焦调节器；为调节焦距之用。 大旋钮为粗调节器，转动粗调节钮可使镜筒(或载物台)升降，调节焦距。旋转一周可使镜筒(或戴物台)升降10mm。一般用于低倍镜调焦。 小旋钮为细调节器，转动细调节钮可使镜筒(或超物台)缓慢升降，每旋转一周约使镜筒(或载物台)升降0.1mm。适用于高倍镜、油镜或分辨物象清晰度调焦。 2）照明部分 （1）反光镜；载物台下方，一面为平面．一面为凹面。平面镜聚光力弱．适于强光源和平行光源。凹面镜聚光力强．适用于弱光源或散射光源。反射镜的方位可以随意调节。 （2）聚光器：在载物台下方，由一组透镜组成，可使反射光线聚集于标本上。一般在镜柱一侧有一旋钮，可使聚光器升降，和物镜配合使用。 （3）光圈：在集光器下方，由一组活动金属片组成，构成一个可开可缩的孔。在其外侧有一小柄，可以调节控制光线通过。在光圈的下方常装有滤光片架，可以放置不同颜色的滤光片。 3）光学部分 （1）目镜：短圆筒状，装在镜筒上端，其上刻有放大倍数，每台显微镜常备有3—4只放大倍数不同的目镜，如5×、10×、15×等。眼睛通过目镜观察物像。 （2）物镜：装在物镜转换器上的一组镜头，一般有低倍镜、高倍镜、油镜三种。每个物镜上刻有相应的标记。低倍镜筒上刻有10×或15×等标志，高倍镜筒上刻有40×或45×标志。油镜上一般为100×。N.A.表示镜口率，镜口率反映镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨力越高。各种物镜的比较见表1-1 注：分辨力用分辨率表示，指能把两个物点分开的最小距离。距离越近，其分辨率越高。显微镜的分辨力可用下列公式来计算： R＝0.61λ／N.A. （N.A.＝n?sinα/2） 上式中R为分辨力，N．A．为镜口率，n为介质的折射率，sinα/2为透镜视锥半顶角的正弦，λ为光波波长。 放大倍数的计算： 实物放大倍效=物镜放大倍数×目镜放大倍数 3.显微镜的使用方法 1）低倍镜的使用 检查：右手握镜臂，从镜箱内取出显微镜，左手托境座，轻轻放在实验桌上。先检查一下显微镜部件有无损坏，如发现有损坏或性能不良者，立即报告教师请求处理。 准备；转动粗调节钮，将镜筒略升高(或将载物台下降)使物镜与载物台距离略拉开。再旋转物镜转换器，将低倍镜对准裁物台中央的通光孔。 对光：打开光圈，上升聚光器，双眼同时睁开，向目镜内观察，同时调节反光镜的方向，直到视野内光线明亮均匀为止。反光镜的平面镜易把其他景物映入视野，一般用凹面镜对光。 放标本片：标本片的盖片朝上。将标本片放到裁物台前方，然后推到物境下面，用压片夹压住，如有标本移动器，可用上面的弹簧夹夹住标本片，然后把要观察的部分移到通光孔的正中央。 调节焦距：从显微镜侧面注视物镜镜头，同时旋转粗调节钮，使镜筒缓慢下降(或镜台上升)，大约低倍镜头与盖片间的距离约5mm时，再从目镜里观察视野，左手缓缓转动粗调节钮，使镜筒缓缓上升，直至视野中出现物像为止。如物像不太清晰，可转动细调节钮，使物像更加清晰。 如果按上述操作步骤仍看不到物像时，可能由以下原因造成： ① 转动调节钮太快，超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距。 ② 物镜没有对正，应对正后再观察。 ③ 标本没有放到视野内，应移动标本片寻找观察对象。 ④ 光线太强，尤其观察比较透明的标本片或没有染色的标本时，应将光线调暗一些后，再现