高效液相色谱法测定布洛芬注射液特定杂质4—异丁基苯乙酮.docVIP

高效液相色谱法测定布洛芬注射液特定杂质4—异丁基苯乙酮 　　摘 要：目的 建立高效液相色谱法测定布洛芬注射液的有关物质的方法。方法 采用WondaSil-C18（5？m，4.6*150mm）色谱柱，以0.01mol/L的磷酸溶液（0.7ml磷酸加水至1000ml）-乙腈（60：40）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为214nm，柱温为30℃。结果 在该色谱条件下的系统适用性试验中，布洛芬与2-（4-丁基苯基）丙酸分离良好，精氨酸对有关物质检测无干扰。结论 该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。 　　关键词：布洛芬注射液 有关物质 高效液相色谱法 　　布洛芬注射液（商品名：Caldolor）于2009年6月在美国上市，主要用于轻、中度疼痛的治疗以及中、重度疼痛阿片类的辅助用药[1]。为有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱法[2]，对布洛芬注射液有关物质进行控制，结果该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。 　　一、仪器与试药 　　1.仪器 　　岛津SPD-M20A高效液相色谱仪 　　2.样品 　　布洛芬对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100179-200804，含量：99.5%）；布洛芬注射液（山东方明药业集团股份有限公司，批号：1208051，规格：布洛芬4ml：400mg）；2-（4-丁基苯基）丙酸对照品（Code：B1220000）；4-异丁基苯乙酮对照品，批号10417。乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯，水为纯化水。 　　二、方法与结果 　　1.色谱条件 　　色谱柱为WondaSil-C18（5μm，4.6*150mm），流动相为0.01mol/L的磷酸溶液（0.7ml磷酸加水至1000ml）-乙腈（60：40），流速为1.0ml/min，检测波长为214nm，柱温为30℃；进样量：20μl。 　　2.溶液的配制 　　2.1供试品溶液：精密量取本品1.2ml（约相当于含布洛芬120mg）置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。 　　2.2对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 　　2.3 4-异丁基苯乙酮对照品溶液：精密称取布洛芬4-异丁基苯乙酮对照品适量加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含4-异丁基苯乙酮1.2μg的溶液，作为杂质对照品溶液。 　　2.4系统适用性试验溶液：精密称取布洛芬对照品、2-（4-丁基苯基）丙酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含布洛芬1.2mg、杂质B3.6μg的溶液，作为系统适用性试验溶液。 　　3.方法学考察 　　3.1测定波长的选择 　　参照欧洲药典布洛芬有关物质方法，制定检测波长为214nm。 　　3.2系统适用性试验 　　取系统适用性试验溶液按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，2-（4-丁基苯基）丙酸峰与布洛芬峰分离度良好。 　　3.3专属性考察 　　破坏性试验：取样品适量，经酸、碱、氧化、高温、光照破坏后，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，本品在光照、碱性、酸性、氧化、高温强制降解条件下主要降解产物为相对保留时间为1.4倍的峰，对该杂质归属为4-异丁基苯乙酮；降解过程如下： 　　→ 　　试验结果表明，主峰与相邻杂质的分离度良好，本色谱条件对降解产物专属性良好。 　　3.4线性范围 　　取布洛芬对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成一定浓度的溶液，取不同体积，用流动相稀释成不同浓度，分别量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，以浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=46298.15C+3512.92，r=0.999993（n=6），结果表明布洛芬在0.1274～25.4720μg /ml浓度范围内线性关系良好。 　　3.5精密度试验 　　照“2.2”项下方法配制对照溶液，取20μl，连续进样6次，RSD为0.29%。另照“2.3”项下方法配制4-异丁基苯乙酮对照品溶液，取20μl，连续进样6次，结果4-异丁基苯乙酮的RSD为0.42%，表明本方法精密度良好。 　　3.6稳定性试验 　　照“2.1”项下方法制备供试品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果，供试品溶液在室温条件下放置8小时内，杂质检查结果的RSD均小于20.0%，表明供试品溶液在室温条件下放置8小时内稳定性良好。 　　照“2.3”项下方法配制4-异丁基苯乙酮对照品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果4-异丁基苯乙酮的RSD为1.14%，表明本方法4-异丁基苯乙酮稳定性良好