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作者您好,首先感谢您对本编辑部的信任和支持,请您参照投稿格式模板修改文章格式,其中重点需要注意的是:1、文章题目后面请加入*,通讯作者后面加入△并上标注明通讯作者;第一页下方书写充基金项目,收稿日期和修回日期,通讯作者及Tel及E-mail;关键词下方书写中图分类号、文献标识码和文章编号。2、正文中的图表请一律用英文表示,图表下方补齐英文缩写的全称,显著性在表下方写明,按照* ?# △ ▲ ○ ● 顺序列出,并在图表中相应位置标注。3参考文献题目后面请注明文献类型(期刊是J)、作者只列出前三名,后面的用et al代替,请补齐出版的年卷期数及起止页码。其他字体黑体,斜体、加【】,以及字母大小写,空格空行等参见模板。请补寄单位介绍信(有单位公章)和100元审稿费及纸质稿两份。邮寄地址:天津市和平区大理道1号 中国应用生理学编辑部收 ?30005 ? ? ? 您的图片太大,请重新用软件修改或更换保存格式,放在文章相应的位置。 胡永仙1 ,俞康1△ ,谭映霞2 ,沈志坚1,钱红兰1 ,梁彬1,单大铭3 (1.温州医学院附属第一医院血液内科,2.医学科学研究所, 浙江 温州 325000; 3.美国华盛顿大学Bio-Rad实验室主任) 【摘要】目的:构建表达anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ重组非复制型逆转录病毒,转染Jurkat细胞株使其表达目的蛋白。方法:采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/CD80的真核逆转录病毒载体pLNCX质粒上,转染PA 317细胞株,收获上清液获非复制型逆转录病毒,感染NIH 3T3细胞株,用PCR、流式细胞术检测目的基因在NIH 3T3细胞的表达情况,确定病毒滴度。挑取高滴度的包装细胞株收获病毒,感染Jurkat细胞,经G418筛选细胞,用RT-PCR检测目的基因表达情况。结果:经酶切及测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20scFv/CD80/CD28/ζ的成功构建;用PCR能够从逆转录病毒感染的NIH 3T3细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段;流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白;经RT-PCR,能够从转染的Jurkat细胞株中扩增出1条与目的基因大小一致的DNA片段。结论:成功构建高滴度表达anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ非复制型逆转录病毒,并能在Jurkat细胞中表达目的蛋白。 【关键词】 单链抗体; 逆转录病毒; PA 317细胞; 基因表达 【中图分类号】R73-3 【文献标识码】 A 【文章编号】 1000-6834 Construction of recombinant retroviruses expressing anti-CD20 SCFV/CD80/CD28/ζ gene and expression in JURKAT cell line HU Yong-xian1, Yu kang1 ,TAN Yin-xia2 , SHEN Zhi-jian1, QIAN Hong-lan1, LIANG Bin1 ,SHAN Da-ming3 (1. Department of Hematology, Wenzhou Medical College Affiliated First Hospital, Wenzhou, 32500, China; 2. Institute of Medicine; 3. Clinical laboratory, Bio-Rad laboratories Incorporation, California, USA) 【ABSTRACT】Objective: To construct recombinant retroviruses expressing anti-CD20 scFv/ CD80/CD28/ζ gene and detect its expression in Jurkat cells. Methods: CD28-ζcDNA were amplified from plasmids pBULLET and inserted into pLNCX vector that contained anti-CD20 scFv/CD80 gene. The recombinant plasmids were transfected into PA 317 cells. Retroviruses were harvested from culture medium of PA 317 cells.Then NIH 3T3 were transfected with retro

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