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分子信标在生化及金属离子检测方向的应用研究进程课程：专业英语姓名：黄钟明专业： 分析化学 学号：201412151785分子信标在生化及金属离子检测方向的应用研究进程摘要分子信标（Molecular Beacons）是种被设计成发夹型的寡核苷酸荧光探针，并基于自身的高灵敏性、强选择性及特异性等优点而得到广泛关注和发展。它不仅常用于核酸分子检测，而且已经拓展到检测蛋白质、金属离子和有机分子等，还因此衍生出催化分子信标、适配体信标和转录信标等特征形态的生物传感器。分子信标结合纳米技术可应用于基因和蛋白质的实时监测和跟踪，也是目前研究的热点。本文主要论述分子信标在生化和金属离子检测方面的应用及拓展研究。1引言在过去的近二十年里，分子信标已经逐渐发展成为一种比较成熟地以核酸序列为基础的荧光探针，其主要依据荧光能量共振转移来达到检测目的。分子信标首次由Tyagi和Krame1设计出来，且具有环（Loop）和干（Stem）组成的发夹形状，常规的分子信标是由一段包含了茎环结构的单链寡聚核苷酸组成，形成一个发夹型结构。在其环状部分一般是一段长度为15-30个碱基的序列能与目标分子特异结合，茎区是长度为5-8个碱基的互补序列，茎区的两端分别连接有荧光基团和淬灭基团。为了保证分子信标的灵敏度和热力学稳定性，在其茎干区设计的碱基数目一般为其环区的一半分子信标较于其它探针的优势便是依赖于自身的这种形态特征。其特征主要表现在信-背比大、灵敏度高、特异性识别能力强及结构简单等方面，正因为具有这些优点，分子信标吸引了很多研究工作者，也因此得到了迅速发展。首先，在DNA芯片发展和应用2、DNA和RNA检测3、基因突变检测2, 4和聚合酶链反应（PCR）监测过程中5，分子信标和其它核酸探针的原理相同，也是利用碱基互补配对原理进行对目标分子识别。研究者们已经在上述领域里做了大量的工作，并得到了实质性的进展，这对生物医学探究、疾病的诊断和新药物的发现起了很大的作用。其次，分子信标还可以直接或间接的检测蛋白6、氨基酸7和其它生物分子8。例如，凝血酶是人体内很重要的蛋白分子，可以把它相应的适配体设计成分子信标的形状，得到了很好的检测效果，此时的探针可以称为适配体信标。当然还有干扰素9和ATP之类的生物分子。另外，就金属离子而言，利用有机分子、有机聚合物、短肽和蛋白检测的文献报道时常为人们所熟知，以核酸探针为平台来检测金属离子似乎令人难以想象。可是，金属离子的检测在近年来借以DNA传感器也取得了很大的突破。无论是生物体内还是环境中的金属离子，其对我们的生存健康起着至关重要的作用。发展一种对环境友好和对生物体损伤小的检测方法是可观的，也是很有前途的，而DNA探针就具备这样的特点。由于许多酶中需要特殊的金属离子或者可以和某些金属离子可以特异性结合，这样便为利用DNA探针检测金属离子提供了切入口。当然，此种DNA探针也能设计成分子信标的形状，而且对金属离子检测的灵敏度也有很大的改善。例如，当某种离子存在时，可以促使DNA酶切割分子信标形态的DNA序列，这时分子信标结构被破坏，从而达到检测目的。在这里，分子信标称为催化信标10，其归因于它的作用原理。其实，核酸探针的发展与纳米技术之间的联系更为紧密11，功能化核酸探针结合纳米材料对分子识别有着很可观的改善。纳米材料修饰59上被设计成功能化的DNA探针，并有较大的比表面积。依据各种纳米材料的物理和化学性质，它们可以促进信号传导或放大识别信号，识别信号甚至可以放大好几个数量级。另外，协同作用在信号识别过程中也起着重要的角色，它不仅可以增多与目标分子的结合点，还可以提高对目标物的选择，有的甚至可以防止DNA探针被DNA酶降解掉。结合分子信标和纳米材料的特殊性质和功能，使核酸、蛋白等检测有很多优势。目前被报道的纳米材料有纳米颗粒12、纳米棒13、纳米板、纳米线，还有石墨烯14之类的材料。其中，用的最为广泛的纳米材料有金纳米15、硅纳米颗粒16、碳纳米管17和量子点18等。最近稀土上转换纳米材料开始进入研究工作者的视野，而且在生物成像、核酸识别和蛋白质检测方面已经有了初步的进展。由此看出，利用分子信标和纳米材料所特有的优势，进行生物成像、生物分析和金属检测仍具有很大的潜力。2分子信标的原理分子信标作为DNA核酸探针的一种，它的发夹结构仍是由核酸碱基序列组成。在核酸检测中，一般是由分子信标的环与靶分子结合，干部分为两列互补的碱基序列。其中环具有15~20个碱基，干具有5~7个碱基对。当然，根据测定的目标物不同，可以对其结构进行调整，或者进行改进。最初的分子信标在干的两端分别是荧光基团和猝灭基团。目标分子不存在时，分子信标保持原来构象，荧光团和猝灭基团接触，由于荧光能量共振转移（FRET）而不发出荧光信号。当分子信标与目标分子结