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光谱法研究头孢唑啉钠和头孢呋辛与木瓜酶的作用机制 姓名：卫国强 指导老师：席小莉 摘要 利用荧光光谱和紫外光谱研究了头孢唑啉钠和头孢呋辛钠与木瓜蛋白酶之间的相互作用，求得了不同温度下的结合常数K。.研究结果表明，静态猝灭是导致头孢唑啉钠和头孢呋辛钠对木瓜蛋白酶荧光猝灭的主要原因。通过计算热力学参数，确定了二者与木瓜酶之间相互作用力的类型。同时，根据Forster非辐射能量转移理论求出给体-受体之间的结合距离和能量转移效率。 关键词 木瓜蛋白酶；唑啉钠；呋辛钠；荧光光谱；紫外吸收光谱； Mechanism of Molecular Interaction between andPapain: Spectroscopic Investigations Abstract The interaction between cefazoline,cefuroxime and papain was investigated by fluorescence spectroscopy and UV-Vis absorption spectroscopy ,and the binding constants K were obtained at different temperatures. The experimental results suggested that static quenching was the main reason for the fluorescence quenching process. The thermodynamic data obtained showed the kinds of predominant intermolecular forces between them. According to the Forster theory of non—radiation energy transfer,We calculate the bilding distance between the offer and the accepter and the effiency of the energy transfer. Keywords papain; cefazoline,cefuroxime; fluorescence spectroscopy; UV-Vis absorption spectroscopy; 蛋白质是一类重要的生命物质，担负着生命活动过程中多种极其重要的功，目前，利用光谱法的研究主要针对血清白蛋白,这是因为血清白蛋白是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白，具有储运内源性代谢产物和外源性药物小分子等重要生理功能[1-4]。木瓜蛋白酶简称木瓜酶，它是一种含巯基肽链的内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，它能把蛋白水解物合成为类蛋白质，由于其具有纯天然、无毒无害、使用安全等功能特性，而被广泛用于食品、美容化妆品、医药保健品、日化品、饲料、皮革、纺织品等行业[5]，但目前对它的研究还很少。 头孢唑啉钠和头孢呋辛钠是抗菌类药物的一种, 最近十多年来, 已迅速发展成为一类广泛应用于临床的一线抗感染药物, 它具有临床疗效好、不良反应少、可达到较高的治愈率等特点，因此，研究二者与木瓜酶的作用机制在医学上有重要的意义。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 荧光光度计（美国Varian公司）；紫外分光光度计（日本岛津UV-265型） 木瓜酶（分子量21000）配置成1×10-6mol/L 溶液；头孢唑啉钠和头孢呋辛钠（海口奇力制药有限公司）配置成浓度为1×10-3mol/L溶液；pH为7.4的Tris-HCL缓冲液 1.2 唑啉钠和呋辛钠与木瓜蛋白酶作用的荧光光谱测定 加2ml木瓜酶于荧光池中，设定激发波长为275nm，激发与发射狭缝为10nm，在288K下每次加2ul唑啉钠，扫描280-500nm的荧光发射光谱，在298K和303K下重复上述实验。同理，在288K，298K和310K下将呋辛钠加入木瓜酶再扫描荧光发射光谱。 1.3 唑啉钠和呋辛钠与木瓜酶的紫外光谱测定 设定温度为298K，用Tris-HCL缓冲液扣空白，加2ml木瓜酶于紫外池中，扫描其在200-800nm的紫外吸收，然后每次加入1ul唑啉钠或呋辛钠，扫描紫外吸收光谱。 1.4 唑啉钠和呋辛钠与木瓜酶作用的同步荧光光谱 激发和发射单色器同时进行扫描，改变发射波长λem与激发波长λex之间的波长差Δλ＝15nm, λem＝λex＋Δλ,令激发波长在250-320nm范围内扫描，得到木瓜酶和不同浓度的唑啉钠或呋辛钠的混合液中酪氨酸生色团的荧光光谱图。改变发射波长λem与激发波长λex之间的波长差△λ=60nm